| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 目录 | 第11-17页 |
| 引言 | 第17-33页 |
| 1. Hippo信号通路及其信号调控 | 第17-24页 |
| 1.1 Hippo信号通路主要成员 | 第17-18页 |
| 1.2 YAP上下游基因及调控 | 第18-22页 |
| 1.3 YAP与TEAD家族作用研究 | 第22-23页 |
| 1.4 Hippo通路与其他信号通路之间的调控机制 | 第23-24页 |
| 2. Hippo信号通路与肿瘤研究 | 第24-27页 |
| 2.1 肿瘤耐药机制 | 第24-25页 |
| 2.2 Hippo信号通路与肿瘤 | 第25-27页 |
| 3. Hippo信号通路与癌干细胞研究 | 第27-30页 |
| 3.1 癌干细胞筛选及标记物鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2 Hippo信号通路与干细胞研究 | 第28-30页 |
| 4. 本论文研究目的和意义 | 第30-31页 |
| 技术路线图 | 第31-33页 |
| 第一部分 YAP/TEAD与卵巢癌患者预后的关系研究 | 第33-49页 |
| 前言 | 第33页 |
| 1. 材料与方法 | 第33-35页 |
| 1.1 材料 | 第33-34页 |
| 1.2 实验方法及步骤 | 第34-35页 |
| 2. 结果 | 第35-44页 |
| 2.1 YAP/TEAD在人卵巢癌组织中高表达 | 第35-37页 |
| 2.2 YAP与卵巢癌患者预后的关系 | 第37-40页 |
| 2.3 YAP和TEAD的表达水平与卵巢癌患者预后关系 | 第40-41页 |
| 2.4 EMT标志物与卵巢癌患者临床预后的关系 | 第41-44页 |
| 3. 讨论 | 第44-49页 |
| 第二部分 YAP在卵巢癌增殖、肿瘤形成及转移中的作用 | 第49-75页 |
| 前言 | 第49-50页 |
| 第一节 YAP促进卵巢癌细胞增殖及肿瘤形成 | 第50-60页 |
| 1. 材料与方法 | 第50-53页 |
| 1.1 材料 | 第50-52页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第52-53页 |
| 2. 实验方法及步骤 | 第53-57页 |
| 2.1 蛋白样品制备 | 第53页 |
| 2.2 蛋白免疫印迹 | 第53-54页 |
| 2.3 免疫组化 | 第54页 |
| 2.4 卵巢癌细胞培养 | 第54-55页 |
| 2.5 慢病毒包装 | 第55页 |
| 2.6 稳转细胞系筛选 | 第55页 |
| 2.7 细胞增殖实验(MTT) | 第55-56页 |
| 2.8 平板克隆实验 | 第56页 |
| 2.9 软琼脂克隆实验 | 第56页 |
| 2.10 裸鼠皮下成瘤 | 第56-57页 |
| 3. 结果 | 第57-60页 |
| 3.1 卵巢癌细胞系中YAP的表达水平及稳转细胞系的构建 | 第57页 |
| 3.2 YAP促进卵巢癌细胞增殖及克隆形成 | 第57-60页 |
| 第二节 YAP促进卵巢肿瘤细胞迁移与EMT | 第60-66页 |
| 1. 材料与方法 | 第60-62页 |
| 1.1 主要试剂 | 第60-61页 |
| 1.2 主要仪器 | 第61-62页 |
| 2. 实验方法及步骤 | 第62-64页 |
| 2.1 划痕实验 | 第62页 |
| 2.2 Transwell细胞迁移实验 | 第62-63页 |
| 2.3 肿瘤细胞裸鼠体内转移实验 | 第63页 |
| 2.4 HE染色及免疫组织化学染色 | 第63页 |
| 2.5 组织蛋白提取及蛋白免疫印迹 | 第63页 |
| 2.6 动物活体成像 | 第63-64页 |
| 3. 结果 | 第64-66页 |
| 3.1 YAP促进卵巢癌细胞体外迁移 | 第64页 |
| 3.2 YAP促进卵巢癌细胞体内转移 | 第64-66页 |
| 第三节 YAP增强卵巢肿瘤细胞耐药性 | 第66-72页 |
| 1. 材料 | 第66-67页 |
| 1.1 抗体及主要试剂 | 第66-67页 |
| 1.2 主要仪器 | 第67页 |
| 2. 方法 | 第67-69页 |
| 2.1 组织HE染色 | 第67-68页 |
| 2.2 免疫组织化学 | 第68页 |
| 2.3 MTT | 第68页 |
| 2.4 蛋白免疫印迹 | 第68页 |
| 2.5 流式细胞检测 | 第68-69页 |
| 2.6 裸鼠成瘤及耐药实验 | 第69页 |
| 3. 结果 | 第69-72页 |
| 3.1 YAP增强卵巢癌细胞药物耐受性 | 第69-70页 |
| 3.2 降低YAP活性可逆转卵巢癌细胞耐药性 | 第70-72页 |
| 讨论 | 第72-75页 |
| 第三部分 YAP参与卵巢癌干细胞的干性维持及耐药 | 第75-117页 |
| 前言 | 第75-76页 |
| 第一节 卵巢癌干细胞培养与鉴定 | 第76-86页 |
| 1. 材料 | 第76-79页 |
| 1.1 抗体及主要试剂 | 第76-78页 |
| 1.2 主要仪器 | 第78页 |
| 1.3 引物 | 第78-79页 |
| 2. 方法 | 第79-82页 |
| 2.1 卵巢癌干细胞分离培养 | 第79页 |
| 2.2 卵巢癌干细胞鉴定 | 第79-80页 |
| 2.3 RNA提取 | 第80-81页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第81页 |
| 2.5 HE及免疫组化染色 | 第81-82页 |
| 3. 结果 | 第82-86页 |
| 3.1 卵巢癌干细胞的生长状况及镜下观察 | 第82-83页 |
| 3.2 干细胞标记物鉴定 | 第83页 |
| 3.3 干细胞表面分子及分化鉴定 | 第83页 |
| 3.4 卵巢癌干细胞的致瘤能力增强 | 第83-86页 |
| 第二节 YAP及TEAD家族在卵巢癌干细胞中的表达 | 第86-92页 |
| 1. 材料 | 第86-88页 |
| 1.1 抗体及主要试剂 | 第86-87页 |
| 1.2 引物 | 第87-88页 |
| 1.3 仪器设备 | 第88页 |
| 2. 实验方法及步骤 | 第88-91页 |
| 2.1 RNA提取 | 第88-89页 |
| 2.2 RNA逆转录 | 第89-90页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR | 第90页 |
| 2.4 免疫荧光 | 第90-91页 |
| 2.5 蛋白免疫印迹 | 第91页 |
| 3. 结果 | 第91-92页 |
| 3.1 YAP在卵巢癌干细胞中高表达 | 第91页 |
| 3.2 TEAD家族在卵巢癌干细胞中高表达 | 第91-92页 |
| 第三节 YAP和TEAD沉默的细胞构建及验证 | 第92-100页 |
| 1. 材料 | 第92-95页 |
| 1.1 抗体及主要试剂 | 第92-93页 |
| 1.2 引物 | 第93-94页 |
| 1.3 shRNA序列 | 第94页 |
| 1.4 仪器设备 | 第94-95页 |
| 2. 方法 | 第95-97页 |
| 2.1 慢病毒包装及滴度检测 | 第95页 |
| 2.2 shRNA病毒感染卵巢癌干细胞 | 第95-96页 |
| 2.3 RNA提取及反转录 | 第96页 |
| 2.4 实时荧光定量PCR | 第96页 |
| 2.5 蛋白提取 | 第96-97页 |
| 2.6 蛋白免疫印迹 | 第97页 |
| 3. 结果 | 第97-100页 |
| 3.1 YAP及TEAD基因沉默效率验证 | 第97-98页 |
| 3.2 YAP及TEAD1/3/4沉默后OCIC表型变化 | 第98页 |
| 3.3 YAP及TEAD1/3/4沉默后OCIC干细胞标记物变化 | 第98-100页 |
| 第四节 YAP下游靶基因参与卵巢癌干细胞干性维持 | 第100-103页 |
| 1. 材料 | 第100-101页 |
| 1.1 抗体及主要试剂 | 第100-101页 |
| 1.2 仪器设备 | 第101页 |
| 2. 方法 | 第101-102页 |
| 2.1 实时荧光定量PCR | 第101页 |
| 2.2 蛋白免疫印迹 | 第101-102页 |
| 3. 结果 | 第102-103页 |
| 3.1 YAP下游基因在卵巢癌干细胞中的表达 | 第102页 |
| 3.2 YAP和TEAD沉默后下游基因的表达 | 第102-103页 |
| 第五节 YAP通过TEAD增强卵巢癌干细胞耐药性 | 第103-110页 |
| 1. 材料 | 第103-105页 |
| 1.1 抗体及主要试剂耗材 | 第103-104页 |
| 1.2 仪器设备 | 第104-105页 |
| 1.3 引物 | 第105页 |
| 2. 方法 | 第105-106页 |
| 2.1 实时荧光定量PCR | 第105-106页 |
| 2.2 MTT | 第106页 |
| 3. 结果 | 第106-110页 |
| 3.1 耐药基因筛选 | 第106-107页 |
| 3.2 卵巢癌干细胞耐药性表型变化 | 第107-108页 |
| 3.3 YAP及TEAD沉默后卵巢癌干细胞耐药基因表达差异 | 第108-110页 |
| 第六节 MAPK通路参与YAP维持卵巢癌干细胞干性 | 第110-113页 |
| 1. 材料 | 第110-111页 |
| 1.1 主要试剂 | 第110页 |
| 1.2 引物 | 第110-111页 |
| 2. 方法 | 第111页 |
| 2.1 RNA提取及反转录 | 第111页 |
| 2.2 实时荧光定量PCR | 第111页 |
| 2.3 蛋白免疫印迹 | 第111页 |
| 3. 结果 | 第111-113页 |
| 3.1 MAPK通路中的重要基因在卵巢癌干细胞中表达上调 | 第111-113页 |
| 讨论 | 第113-117页 |
| 参考文献 | 第117-125页 |
| 作者简介及科研成果 | 第125页 |
