| 目录 | 第2-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一部分 遗传性对称性色素异常症致病基因的定位研究 | 第11-29页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 材料与方法 | 第13-21页 |
| 一、实验材料 | 第13-16页 |
| 1. 家系资料 | 第13页 |
| 2. 主要材料、试剂及配制 | 第13-16页 |
| 3. 主要仪器设备 | 第16页 |
| 二、实验方法 | 第16-21页 |
| 1. 基因组 DNA的提取 | 第16-17页 |
| 2. 短串联重复序列的PCR扩增 | 第17-18页 |
| 3. 变性聚丙烯酞胺凝胶电泳及银染 | 第18-19页 |
| 4. STR等位片段的分析 | 第19页 |
| 5. 两点连锁分析 | 第19-20页 |
| 6. 确定连锁标记在物理图谱中的位置 | 第20-21页 |
| 实验结果 | 第21-26页 |
| 一、遗传性对称性色素异常症家系临床资料 | 第21页 |
| 二、遗传性对称性色素异常症致病基因的定位 | 第21-26页 |
| 1. 个体的等位基因型 | 第22页 |
| 2. 两点连锁分析 | 第22-23页 |
| 3. 单体型的构建 | 第23页 |
| 4. 1号染色体微卫星标记在物理图谱中的再定位 | 第23-26页 |
| 讨论 | 第26-29页 |
| 第二部分 遗传性对称性色素异常症致病基因的突变研究 | 第29-45页 |
| 前言 | 第29-30页 |
| 材料与方法 | 第30-37页 |
| 一、实验材料 | 第30-31页 |
| 1. 家系资料 | 第30-31页 |
| 2. 主要材料与试剂 | 第31页 |
| 二、实验方法 | 第31-37页 |
| 1. 外周血白细胞基因组DNA的提取 | 第31页 |
| 2. ADAR基因全部外显子区及内含子-外显子交界区的扩增 | 第31-33页 |
| 3. PCR扩增产物的纯化 | 第33-34页 |
| 4. 纯化结果的定量检测 | 第34页 |
| 5. 目的DNA片段测序 | 第34页 |
| 6. DNA测序结果分析 | 第34-35页 |
| 7. 4个家系中ADAR基因突变的酶切分析验证 | 第35-37页 |
| 实验结果 | 第37-42页 |
| 一、家系临床资料 | 第37-38页 |
| 二、4个DSH家系中ADAR基因突变分析 | 第38-42页 |
| 讨论 | 第42-45页 |
| 第三部分 遗传性对称性色素异常症的遗传学致病机制研究 | 第45-60页 |
| 前言 | 第45-46页 |
| 材料与方法 | 第46-51页 |
| 一、外周血中单个核细胞的分离 | 第46页 |
| 二、RNA的提取和反转录 | 第46-47页 |
| 三、RT-PCR反应 | 第47-51页 |
| 1. 外显子跳跃(exon skipping)的检测 | 第47-48页 |
| 2. cDNA水平的突变检测 | 第48页 |
| 3. 实时定量RT-PCR | 第48-51页 |
| 实验结果 | 第51-55页 |
| 一、RNA质量鉴定 | 第51页 |
| 二、外显子跳跃的检测 | 第51页 |
| 三、基因组DNA与cDNA水平突变的比较 | 第51-53页 |
| 四、患者单个核细胞中ADAR基因表达的相对定量 | 第53-55页 |
| 1. 倍比稀释实验 | 第53页 |
| 2. DSH患者ADAR基因相对表达量 | 第53-55页 |
| 讨论 | 第55-60页 |
| 一、遗传性对称性色素异常症的发病机制 | 第55-58页 |
| 二、实时定量PCR的应用和分析 | 第58-60页 |
| 第四部分 ADAR基因在UVB诱导人黑色瘤细胞凋亡过程中的作用分析 | 第60-85页 |
| 前言 | 第60-61页 |
| 材料与方法 | 第61-73页 |
| 一、实验材料 | 第61-62页 |
| 1. 细胞系 | 第61页 |
| 2. 菌株和质粒 | 第61页 |
| 3. 主要试剂及试剂盒 | 第61-62页 |
| 4. 主要器皿和仪器 | 第62页 |
| 二、实验方法 | 第62-73页 |
| 1. 质粒的构建与筛选 | 第62-65页 |
| 2. 细胞培养 | 第65页 |
| 3. 脂质体介导的A375细胞转染 | 第65-66页 |
| 4. UVB处理转染后A375细胞 | 第66页 |
| 5. RNA干扰操作过程 | 第66-68页 |
| 6. 转导细胞的DNA结构分析 | 第68页 |
| 7. ADAR基因抑制效率检测 | 第68-69页 |
| 8. UVB处理诱导细胞凋亡 | 第69-70页 |
| 9. Western印迹 | 第70-73页 |
| 实验结果 | 第73-79页 |
| 一、A375细胞中ADAR基因转录产物的检测 | 第73页 |
| 二、ADAR蛋白的亚细胞定位 | 第73-74页 |
| 三、ADAR蛋白在UVB处理的转染后 A375细胞内的定位 | 第74页 |
| 四、逆转录病毒介导的ADAR基因特异性 RNA干扰质粒的鉴定 | 第74-76页 |
| 五、抗性细胞克隆库形成 | 第76页 |
| 六、实时定量 RT-PCR检测 ADAR基因抑制效率 | 第76页 |
| 七、UVB诱导对 ADAR基因抑制后细胞凋亡的影响 | 第76-79页 |
| 讨论 | 第79-85页 |
| 一、ADAR蛋白的细胞定位 | 第79-81页 |
| 二、ADAR基因表达抑制对UVB诱导A375细胞凋亡的影响 | 第81-85页 |
| 1. 逆转录病毒载体介导的RNA干扰(RNA interference，RNAi)技术 | 第81-82页 |
| 2. UVB诱导的A375-siADAR细胞凋亡研究 | 第82-85页 |
| 学位论文总结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-96页 |
| 文献综述 | 第96-105页 |
| 附录一 英汉名词对照及缩写 | 第105-106页 |
| 附录二 分析软件及常用网址 | 第106-107页 |
| 个人简历 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
