| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1. 前言 | 第8-21页 |
| ·剑麻及其生产概况 | 第8页 |
| ·剑麻斑马纹病 | 第8-9页 |
| ·国内外剑麻育种研究状况 | 第9-10页 |
| ·植物抗真菌病害基因的研究利用综述 | 第10-15页 |
| ·植物诱导抗病性 | 第10-11页 |
| ·HR反应 | 第11页 |
| ·SAR | 第11页 |
| ·抗病基因的筛选 | 第11-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-17页 |
| ·真核表达系统的发展及优点 | 第15-16页 |
| ·毕赤酵母表达质粒——pGAPZαA | 第16-17页 |
| ·植物表达载体 | 第17-19页 |
| ·实验目的和意义 | 第19-20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| 2. 实验材料 | 第21-25页 |
| ·质粒与菌株 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·工具酶类 | 第21页 |
| ·试剂盒 | 第21页 |
| ·抗生素 | 第21页 |
| ·各类Maker | 第21页 |
| ·其他 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·主要溶液的配制 | 第22-25页 |
| 3. 实验方法 | 第25-40页 |
| ·病毒诱导型启动子Hsr203J的获取 | 第25-30页 |
| ·烟草DNA的提取(CP Plant Miniprep Kit) | 第25页 |
| ·PCR扩增启动子Hsr203J | 第25-26页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·胶回收目的基因片断(Gel Extraction Mini Kit) | 第26-27页 |
| ·超级感受态(E.Coli DH5α)的制备:Inoue方法 | 第27页 |
| ·启动子基因Hsr203J的TA-cloning | 第27-28页 |
| ·Hsr203J基因的TA-cloning转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第28页 |
| ·克隆载体pMD-18T-Hsr203J的菌落PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的pMD-18T-Hsr203J质粒提取(SDS碱裂解法) | 第29页 |
| ·载体pMD-18T-Hsr203J的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·目的基因ApCL | 第30-36页 |
| ·穿梭质粒pGAPZαA-ApCL的构建 | 第30-35页 |
| ·重组表达载体pGAPzaA-ApcL电转化毕赤酵母及蛋白的表达 | 第35-36页 |
| ·目的基因Hevein | 第36-37页 |
| ·穿梭质粒pGAPZαA-Hevein的构建 | 第37页 |
| ·重组表达载体pGAPZαA-ApCL电转化毕赤酵母及蛋白的表达 | 第37页 |
| ·毕赤酵母表达蛋白的回收浓缩及注射烟草鉴定 | 第37页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·组成型表达载体pCAMB1A1302-ApCL/Hevein的构建 | 第37-40页 |
| 4. 实验结果与分析 | 第40-48页 |
| ·启动子基因Hsr203J的获取 | 第40-41页 |
| ·目的基因ApCL | 第41-44页 |
| ·穿梭质粒pGAPZαA-ApCL的构建 | 第41-43页 |
| ·穿梭质粒pGAPZαA-ApCL电转化毕赤酵母GS115 | 第43-44页 |
| ·目的基因Hevein | 第44-46页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第46-48页 |
| 5. 结论与讨论 | 第48-50页 |
| ·结论 | 第48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| ·转化的毕赤酵母表达的蛋白与烟草HR反应 | 第48页 |
| ·关于ApCL蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·ApcL基因的功能分析 | 第49页 |
| ·后续工作 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
