| 目录 | 第4-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 縮略词 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-21页 |
| 一、沙雷氏菌属的研究进展 | 第13-14页 |
| 1. 沙雷氏菌属的简介 | 第13页 |
| 2. 沙雷氏菌胞外分泌物的研究概况 | 第13-14页 |
| 二、金属蛋白酶的研究进展 | 第14-18页 |
| 1. 金属蛋白酶基本介绍 | 第14-15页 |
| 2. 微生物金属蛋白酶结构 | 第15-16页 |
| 3. 金属蛋白酶基因的克隆及表达 | 第16页 |
| 4. 微生物金属蛋白酶的应用 | 第16-17页 |
| 5. 沙雷氏菌分泌的金属蛋白酶的研究概况 | 第17-18页 |
| 三、核酸酶的研究概况 | 第18-19页 |
| 1. 沙雷氏菌中核酸酶研究进展 | 第18-19页 |
| 四、鞭毛蛋白的研究概况 | 第19页 |
| 五、双功能蛋白的研究概况 | 第19-21页 |
| 第一章 沙雷氏菌菌株FS14中DNA酶的分离纯化及其特性的研究 | 第21-49页 |
| 摘要 | 第21页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1.1 菌株 | 第21页 |
| 1.1.2 表达载体 | 第21页 |
| 1.1.3 培养基 | 第21页 |
| 1.1.4 酶和试剂 | 第21-22页 |
| 1.2 实验方法 | 第22-29页 |
| 1.2.1 DNA酶的分离、纯化 | 第22-24页 |
| 1.2.2 DNA酶活性测定 | 第24-25页 |
| 1.2.3 质谱法测定DNA酶的氨基酸序列 | 第25页 |
| 1.2.4 蛋白酶活性的测定 | 第25-26页 |
| 1.2.5 50Ku金属蛋白酶基因的克隆、表达 | 第26-27页 |
| 1.2.6 包涵体的变性、复性及纯化 | 第27-28页 |
| 1.2.7 复性后50Ku金属蛋白酶DNA酶活的检测 | 第28页 |
| 1.2.8 温度对复性后50Ku金属蛋白稳定性的影响 | 第28页 |
| 1.2.9 50Ku金属蛋白酶突变体E174A(50E174A)的克隆、表达 | 第28-29页 |
| 1.2.10 50E174A包涵体的变性、复性及纯化 | 第29页 |
| 1.2.11 复性后50E174A DNA酶活检测 | 第29页 |
| 1.2.12 温度对复性后50E174A稳定性的影响 | 第29页 |
| 1.3 结果与分析 | 第29-46页 |
| 1.3.1 DNA酶的分离、纯化 | 第29-32页 |
| 1.3.2 50Ku蛋白DNA酶活性的检测 | 第32-35页 |
| 1.3.3 纯化的50Ku蛋白的氨基酸序列的测定 | 第35页 |
| 1.3.4 50Ku金属蛋白酶蛋白酶活性的检测 | 第35-37页 |
| 1.3.5 50Ku金属蛋白酶基因的克隆及测序 | 第37-38页 |
| 1.3.6 50Ku金属蛋白酶基因的诱导表达 | 第38-39页 |
| 1.3.7 50Ku金属蛋白酶的表达产物的存在形式的确定 | 第39页 |
| 1.3.8 50Ku金属蛋白酶包涵体变性、复性及纯化 | 第39-40页 |
| 1.3.9 经包涵体复性后的50Ku金属蛋白酶DNA酶活的检测 | 第40-41页 |
| 1.3.10 温度对复性后50Ku金属蛋白酶蛋白稳定性的影响 | 第41-42页 |
| 1.3.11 50Ku金属蛋白酶突变体(50E174A)的构建 | 第42-43页 |
| 1.3.12 50Ku金属蛋白酶突变体(50E174A)基因的表达 | 第43-44页 |
| 1.3.13 50E174A的表达产物的存在形式的确定 | 第44-45页 |
| 1.3.14 50E174A包涵体变性、复性及纯化 | 第45页 |
| 1.3.15 经复性后50E174A DNA酶活性检测 | 第45-46页 |
| 1.3.16 温度对50E174A稳定性的影响 | 第46页 |
| 1.4 讨论 | 第46-48页 |
| 1.5 小结 | 第48-49页 |
| 第二章 沙雷氏菌FS14中鞭毛蛋白的分离、纯化及其基因的克隆、测序鉴定 | 第49-57页 |
| 摘要 | 第49页 |
| 2.1 实验材料 | 第49页 |
| 2.1.1 菌株 | 第49页 |
| 2.1.2 培养基 | 第49页 |
| 2.1.3 酶和试剂 | 第49页 |
| 2.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 2.2.1 40Ku蛋白的分离、纯化及质谱鉴定 | 第49-50页 |
| 2.2.2 鞭毛蛋白基因的克隆、测序 | 第50-51页 |
| 2.3 结果分析 | 第51-54页 |
| 2.3.1 40Ku蛋白的分离、纯化及质谱鉴定 | 第51-52页 |
| 2.3.2 鞭毛蛋白基因(fla)的克隆、测序 | 第52-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-55页 |
| 2.5 小结 | 第55-57页 |
| 全文总结 | 第57-59页 |
| 研究的主要创新点 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 附录一 文中所用试剂配方 | 第67-73页 |
| 附录二 有关核苷酸序列 | 第73-74页 |
| 附录三 | 第74-75页 |
| 附录四 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
