摘要 | 第8-10页 |
ABSTRACT | 第10-11页 |
中英文缩写词表(ABBREVIATIONS) | 第14-15页 |
第一章 绪论 | 第15-23页 |
1.1 ABA在植物中的作用 | 第15-16页 |
1.2 ABA的逆境响应 | 第16页 |
1.3 ABA信号转导途径的转录因子 | 第16-18页 |
1.3.1 MYC和MYB类转录因子 | 第17页 |
1.3.2 AP2类转录因子 | 第17-18页 |
1.3.3 Ring Finger类转录因子 | 第18页 |
1.3.4 其他类转录因子 | 第18页 |
1.4 ABI5亚家族基因研究进展 | 第18-21页 |
1.4.1 ABI5亚家族基因参与逆境的响应 | 第19-20页 |
1.4.2 ABI5亚家族基因表达模式研究现状 | 第20-21页 |
1.5. 研究目的及内容 | 第21-23页 |
1.5.1 研究目的及意义 | 第21-22页 |
1.5.2 研究内容 | 第22-23页 |
第二章 拟南芥ABI5亚家族基因启动子的扩增及其驱动的GUS报告基因表达载体的构建 | 第23-49页 |
2.1 实验材料 | 第23-24页 |
2.1.1 植物材料及培养 | 第23页 |
2.1.2 菌株及载体 | 第23页 |
2.1.3 生化试剂及耗材 | 第23-24页 |
2.1.4 仪器 | 第24页 |
2.2 培养基及溶液配制 | 第24-25页 |
2.2.1 培养基 | 第24页 |
2.2.2 试剂溶液 | 第24-25页 |
2.3 实验方法 | 第25-31页 |
2.3.1 ABI5亚家族基因启动子引物设计 | 第26-27页 |
2.3.2 ABI5亚家族基因上游序列的生物信息学分析 | 第27-28页 |
2.3.3 高纯拟南芥叶片基因组提取 | 第28页 |
2.3.4 启动子克隆 | 第28页 |
2.3.5 ABI5基因启动子驱动的GUS基因植物表达载体构建 | 第28-29页 |
2.3.6 大肠杆菌DH5α 超级感受态细胞制备 | 第29-30页 |
2.3.7 重组质粒转化大肠杆菌DH5α 及鉴定 | 第30页 |
2.3.8 ABF3启动子克隆及载体构建 | 第30-31页 |
2.4 结果分析 | 第31-45页 |
2.4.0 ABI5亚家族基因启动子引物设计 | 第31-32页 |
2.4.1 ABI5亚家族基因启动子序列生物信息学分析 | 第32-43页 |
2.4.2 拟南芥基因组提取及质粒酶切 | 第43页 |
2.4.3 启动子克隆 | 第43-45页 |
2.4.4 重组载体构建 | 第45页 |
2.4.5 测序结果 | 第45页 |
2.5 讨论 | 第45-47页 |
2.6 本章小结 | 第47-49页 |
第三章 ABI5亚家族基因启动子驱动的GUS基因表达载体遗传转化拟南芥及转基因植株组织化学染色研究 | 第49-59页 |
3.1 实验材料 | 第49-50页 |
3.1.1 植物材料及培养 | 第49页 |
3.1.2 菌株及载体 | 第49页 |
3.1.3 生化试剂及耗材 | 第49页 |
3.1.4 仪器 | 第49-50页 |
3.2 培养基及溶液配制 | 第50-51页 |
3.2.1 培养基 | 第50页 |
3.2.2 试剂溶液 | 第50-51页 |
3.3 实验方法 | 第51-54页 |
3.3.1 农杆菌GV3101感受态细胞制备 | 第51页 |
3.3.2 重组质粒转化农杆菌GV3101及鉴定 | 第51页 |
3.3.3 农杆菌花侵染法转化拟南芥 | 第51-52页 |
3.3.4 转化拟南芥筛选 | 第52页 |
3.3.5 拟南芥叶片核DNA粗提取 | 第52-53页 |
3.3.6 PCR鉴定转基因拟南芥的引物设计 | 第53页 |
3.3.7 转基因拟南芥的鉴定 | 第53页 |
3.3.8 转基因拟南芥的无菌培养 | 第53-54页 |
3.3.9 GUS组织染色 | 第54页 |
3.4 结果分析 | 第54-57页 |
3.4.1 重组质粒转化农杆菌GV3101及鉴定 | 第54-55页 |
3.4.2 转基因拟南芥鉴定 | 第55页 |
3.4.3 GUS染色分析 | 第55-57页 |
3.5 讨论 | 第57-58页 |
3.6 本章小结 | 第58-59页 |
第四章 拟南芥ABI5亚家族基因在ABA、低渗、低温等处理下mRNA含量变化分析 | 第59-76页 |
4.1 实验材料 | 第59页 |
4.1.1 植物材料及培养 | 第59页 |
4.1.2 生化试剂及耗材 | 第59页 |
4.1.3 仪器 | 第59页 |
4.2 培养基和溶液配制 | 第59-60页 |
4.2.1 培养基 | 第59-60页 |
4.2.2 试剂溶液 | 第60页 |
4.3.方法 | 第60-64页 |
4.3.1 不同胁迫对拟南芥幼苗生长及发育的影响 | 第60-61页 |
4.3.2 ABI5亚家族基因在ABA、低渗、低温等条件下的表达变化 | 第61-64页 |
4.3.3 生长不同天数拟南芥幼苗中ABI5亚家族基因mRNA含量的变化 | 第64页 |
4.4 结果分析 | 第64-73页 |
4.4.1 不同胁迫对拟南芥种子萌发的影响 | 第64页 |
4.4.2 不同胁迫对拟南芥幼苗生长的影响 | 第64页 |
4.4.3 qRT-PCR引物质量评价 | 第64-66页 |
4.4.4 引物设计及合成 | 第66-67页 |
4.4.5 ABI5亚家族基因对ABA、低渗、低温等条件的响应 | 第67-73页 |
4.4.6 不同生长天数拟南芥幼苗ABI5亚家族基因表达量分析 | 第73页 |
4.5 讨论 | 第73-75页 |
4.6 本章小结 | 第75-76页 |
第五章 PMX-1 遗传转化拟南芥 | 第76-79页 |
5.1 材料与方法 | 第76-77页 |
5.2 结果分析 | 第77页 |
5.2.1 pMX-1 转化农杆菌GV3101及鉴定 | 第77页 |
5.2.2 pMX-1 遗传转化拟南芥抗性植株鉴定 | 第77页 |
5.3 讨论 | 第77-79页 |
结论 | 第79-81页 |
参考文献 | 第81-85页 |
致谢 | 第85-86页 |
附录1 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第86-87页 |
附录2 ABI5亚家族基因启动子序列 | 第87-94页 |
附录3 ABI5亚家族基因启动子元件分析 | 第94-96页 |