| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 前言 | 第10-15页 |
| 1.1 氧化固醇结合蛋白相关蛋白 4（ORP4） | 第11-13页 |
| 1.2 Ca~(2+)平衡 | 第13页 |
| 1.3 活化T细胞核因子（NFAT） | 第13-15页 |
| 第二章 实验材料、实验仪器与试剂 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株、质粒、细胞和动物 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-17页 |
| 2.1.3 引物合成与序列测定 | 第17页 |
| 2.2 主要仪器 | 第17-19页 |
| 2.3 主要试剂配制 | 第19-24页 |
| 2.3.1 基因克隆试剂配制 | 第19页 |
| 2.3.2 酵母双杂交所需试剂 | 第19-21页 |
| 2.3.3 CO-IP所需试剂 | 第21页 |
| 2.3.4 免疫荧光所需试剂 | 第21页 |
| 2.3.5 Ca~(2+)测定所需试剂 | 第21页 |
| 2.3.6 DNA凝胶电泳试剂 | 第21-22页 |
| 2.3.7 SDS-PAGE电泳所需试剂 | 第22页 |
| 2.3.8 Western blotting所需试剂配制 | 第22-23页 |
| 2.3.9 细胞培养所需试剂 | 第23页 |
| 2.3.10 抗生素配制 | 第23-24页 |
| 第三章 实验方法 | 第24-42页 |
| 3.1 质粒构建 | 第24-27页 |
| 3.1.1 PCR反应体系及反应条件 | 第24-25页 |
| 3.1.2 目的片段胶回收 | 第25页 |
| 3.1.3 酶切反应 | 第25-26页 |
| 3.1.4 目的片段酶切后酶清洁、载体酶切后胶回收 | 第26页 |
| 3.1.5 连接反应 | 第26-27页 |
| 3.1.6 转化至大肠杆菌DH5α 感受态细胞 | 第27页 |
| 3.1.7 重组克隆鉴定 | 第27页 |
| 3.1.8 重组质粒提取 | 第27页 |
| 3.2 细胞培养及转染 | 第27-28页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第27-28页 |
| 3.2.2 细胞转染 | 第28页 |
| 3.3 细胞稳定系构建 | 第28页 |
| 3.4 逆转录PCR（RT-PCR） | 第28-30页 |
| 3.4.1 RNA提取(参照Abmion TRI Reagent? Solution manual) | 第28-29页 |
| 3.4.2 逆转录 | 第29页 |
| 3.4.3 PCR反应 | 第29-30页 |
| 3.5 实时定量PCR（q PCR） | 第30-31页 |
| 3.6 流式细胞术（FCM）检测细胞增殖 | 第31页 |
| 3.7 CCK-8 检测细胞增殖 | 第31-32页 |
| 3.7.1 标准曲线绘制 | 第31-32页 |
| 3.7.2 细胞增殖测定 | 第32页 |
| 3.8 酵母双杂交筛选Universal Human c DNA Library | 第32-35页 |
| 3.8.1 p GBDKT7-ORP4L转化酵母菌AH109 | 第32-33页 |
| 3.8.2 筛选Universal Human c DNA Library | 第33页 |
| 3.8.3 β-半乳糖苷酶检测 | 第33-34页 |
| 3.8.4 酵母质粒提取 | 第34页 |
| 3.8.5 酵母质粒点击转化大肠杆菌DH5α | 第34-35页 |
| 3.9 酵母双杂交筛ORP4L与IP3R1相互作用的区域 | 第35-37页 |
| 3.9.1 构建目的质粒p GADT7-IP3R1（2615-2695） | 第35页 |
| 3.9.2 构建诱饵质粒p GBKT7-ORP4L（各片段） | 第35-36页 |
| 3.9.3 通过酵母双杂交筛选与IP3R1相互作用的ORP4L片段 | 第36-37页 |
| 3.10 免疫共沉淀 | 第37-38页 |
| 3.11 免疫荧光 | 第38页 |
| 3.12 Ca~(2+)测定 | 第38-39页 |
| 3.13 双荧光素酶报告分析 | 第39页 |
| 3.14 动物实验 | 第39-40页 |
| 3.15 Western blot | 第40-41页 |
| 3.15.1 SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| 3.15.2 转膜 | 第40-41页 |
| 3.15.3 封闭及孵育抗体 | 第41页 |
| 3.15.4 显影 | 第41页 |
| 3.16 统计分析 | 第41-42页 |
| 第四章 实验结果 | 第42-72页 |
| 4.1 ORP4L促进细胞增殖 | 第42-51页 |
| 4.2 ORP4L与IP3R1相互作用 | 第51-56页 |
| 4.3 ORP4L维持细胞内Ca~(2+)平衡 | 第56-60页 |
| 4.4 ORP4L调节Ca~(2+)依赖的NFAT的活性以及下游靶基因表达 | 第60-63页 |
| 4.5 ORP4L通过调节NFAT3表达来维持IP3R1的稳定表达 | 第63-67页 |
| 4.6 ORP4L敲低抑制裸鼠皮下移植瘤生长 | 第67-72页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第72-75页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 表 1：实验用到的寡核苷酸引物 | 第80-82页 |
| 缩写词中英文对照 | 第82-83页 |
| 载体信息 | 第83-85页 |
| 在学期间发表论文清单 | 第85-86页 |
| 基金支持 | 第86-87页 |
| Genebank公布的ORP4L基因c DNA序列 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
