| 摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-25页 |
| 1.1 牛传染性鼻气管炎的概况 | 第15-23页 |
| 1.1.1 发展历史 | 第15页 |
| 1.1.2 病原学研究 | 第15-17页 |
| 1.1.2.1 分类 | 第15页 |
| 1.1.2.2 形态结构及理化特性 | 第15-16页 |
| 1.1.2.3 病毒主要基因及其编码蛋白 | 第16-17页 |
| 1.1.3 流行病学研究 | 第17-18页 |
| 1.1.3.1 宿主范围及传播方式 | 第17页 |
| 1.1.3.2 分布 | 第17-18页 |
| 1.1.4 致病性研究 | 第18-20页 |
| 1.1.4.1 发病机理 | 第18页 |
| 1.1.4.2 临床症状 | 第18-20页 |
| 1.1.5 诊断 | 第20-21页 |
| 1.1.5.1 细胞培养的病毒分离 | 第20页 |
| 1.1.5.2 电子显微镜检测 | 第20页 |
| 1.1.5.3 PCR（聚合酶链式反应） | 第20页 |
| 1.1.5.4 血清学实验 | 第20-21页 |
| 1.1.6 疫苗研究进展 | 第21-22页 |
| 1.1.6.1 修饰活病毒（MLV）疫苗 | 第21页 |
| 1.1.6.2 灭活苗 | 第21-22页 |
| 1.1.6.3 亚单位疫苗 | 第22页 |
| 1.1.6.4 标记疫苗 | 第22页 |
| 1.1.7 防治 | 第22-23页 |
| 1.2 牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 IBRV单克隆抗体制备 | 第25-34页 |
| 摘要 | 第25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第25-29页 |
| 2.1.1 病毒株、细胞、血清、载体、受体菌与实验动物 | 第25页 |
| 2.1.2 主要生化试剂 | 第25页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第25页 |
| 2.1.4 重组蛋白的表达、鉴定、纯化 | 第25-27页 |
| 2.1.4.1 表达载体的构建 | 第25-26页 |
| 2.1.4.2 gD重组蛋白的表达及纯化 | 第26页 |
| 2.1.4.3 gD重组蛋白的Western blot分析 | 第26-27页 |
| 2.1.5 单克隆抗体的制备 | 第27页 |
| 2.1.5.1 动物免疫 | 第27页 |
| 2.1.5.2 间接ELISA检测方法的建立 | 第27页 |
| 2.1.5.3 细胞融合及阳性杂交瘤细胞的筛选与克隆 | 第27页 |
| 2.1.6 单克隆抗体腹水制备、纯化及效价测定 | 第27-28页 |
| 2.1.6.1 腹水制备 | 第27页 |
| 2.1.6.2 腹水纯化 | 第27-28页 |
| 2.1.6.3 腹水效价测定 | 第28页 |
| 2.1.7 单克隆抗体的生物学特性检测 | 第28-29页 |
| 2.1.7.1 抗体亚类的鉴定 | 第28页 |
| 2.1.7.2 MAb的间接免疫荧光（IFA）鉴定 | 第28页 |
| 2.1.7.3 MAb的Western blot鉴定 | 第28页 |
| 2.1.7.4 MAb的中和活性测定 | 第28页 |
| 2.1.7.5 MAb的特异性测定 | 第28页 |
| 2.1.7.6 MAb的相对亲和常数测定 | 第28-29页 |
| 2.2 结果 | 第29-32页 |
| 2.2.1 gD蛋白的原核表达、鉴定、纯化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.1 表达载体的构建 | 第29页 |
| 2.2.1.2 gD蛋白的表达纯化及鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.2 MAb生物学特性鉴定 | 第30-31页 |
| 2.2.3 MAb的Western blot鉴定 | 第31页 |
| 2.2.4 MAb的IFA鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.5 MAb的特异性测定 | 第32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 单克隆抗体 1G3的抗原表位鉴定 | 第34-40页 |
| 摘要 | 第34页 |
| 3.1 材料与方法 | 第34-36页 |
| 3.1.1 材料 | 第34页 |
| 3.1.1.1 主要载体及试剂 | 第34页 |
| 3.1.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 3.1.2 方法 | 第34-36页 |
| 3.1.2.1 gD蛋白截短表达方案 | 第34-35页 |
| 3.1.2.2 GST融合肽的表达 | 第35页 |
| 3.1.2.3 SDS-PAGE电泳和Western blot分析 | 第35页 |
| 3.1.2.4 抗原表位的精确定位 | 第35页 |
| 3.1.2.5 抗原表位分析 | 第35-36页 |
| 3.2 结果 | 第36-39页 |
| 3.2.1 MAb的Western blot鉴定 | 第36页 |
| 3.2.2 MAb1G3抗原表位初步鉴定 | 第36-37页 |
| 3.2.3 MAb1G3抗原表位的精确定位 | 第37-38页 |
| 3.2.3.1 MAb1G3识别真实表位的最小反应活性单元 | 第37页 |
| 3.2.3.2 MAb1G3识别真实表位最大反应活性的最小单元 | 第37-38页 |
| 3.2.4 抗原表位分析 | 第38-39页 |
| 3.3 讨论 | 第39-40页 |
| 第四章 双抗夹心ELISA的建立 | 第40-50页 |
| 摘要 | 第40页 |
| 4.1 材料与方法 | 第40-42页 |
| 4.1.1 毒株 | 第40页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 单克隆抗体的HRP标记 | 第40页 |
| 4.1.4 夹心ELISA方法的建立 | 第40-42页 |
| 4.1.4.1 包被抗体及检测抗体的最佳浓度确定 | 第40-41页 |
| 4.1.4.2 最佳封闭液的确定 | 第41页 |
| 4.1.4.3 最佳封闭时间的确定 | 第41页 |
| 4.1.4.4 样品最佳孵育时间的确定 | 第41页 |
| 4.1.4.5 检测抗体最佳作用时间的确定 | 第41页 |
| 4.1.4.6 底物最佳显色时间的确定 | 第41页 |
| 4.1.4.7 Cut-off值的确定 | 第41-42页 |
| 4.1.4.8 特异性试验 | 第42页 |
| 4.1.4.9 敏感性试验 | 第42页 |
| 4.1.4.10 重复性试验 | 第42页 |
| 4.1.4.11 双抗夹心ELISA与PCR检测结果的符合率 | 第42页 |
| 4.2 结果 | 第42-48页 |
| 4.2.1 包被抗体和检测抗体最佳稀释度的确定 | 第42-43页 |
| 4.2.2 最佳封闭液的确定 | 第43页 |
| 4.2.3 最佳封闭时间的确定 | 第43-44页 |
| 4.2.4 样品最佳孵育时间的确定 | 第44页 |
| 4.2.5 检测抗体最佳作用时间的确定 | 第44页 |
| 4.2.6 底物最佳显色时间的确定 | 第44-45页 |
| 4.2.7 Cut-off值的确定 | 第45页 |
| 4.2.8 特异性试验结果 | 第45页 |
| 4.2.9 夹心ELISA方法的确定 | 第45页 |
| 4.2.10 敏感性试验结果 | 第45-46页 |
| 4.2.11 重复性试验结果 | 第46-47页 |
| 4.2.12 双抗夹心ELISA与PCR检测结果的符合率 | 第47-48页 |
| 4.3 后续补充试验及结果 | 第48-49页 |
| 4.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第五章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简历 | 第57页 |
