| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 MIGS沉默技术概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 MIGS沉默技术的研究背景 | 第10-11页 |
| 1.1.2 tasiRNA的产生及作用机制 | 第11-13页 |
| 1.2 查尔酮合成酶简介 | 第13-14页 |
| 1.2.1 查尔酮合成酶及其作用 | 第13页 |
| 1.2.2 查尔酮合成酶与花色 | 第13-14页 |
| 1.2.3 查尔酮合成酶的生物学功能 | 第14页 |
| 1.3 八氢番茄红素脱氢酶简介 | 第14-15页 |
| 1.4 T/A克隆简介 | 第15-16页 |
| 1.5 矮牵牛的简介 | 第16-18页 |
| 第二章 引言 | 第18-20页 |
| 2.1 研究背景及意义 | 第18-19页 |
| 2.2 技术路线 | 第19-20页 |
| 第三章 材料与方法 | 第20-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第20页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第20页 |
| 3.1.4 试剂盒及主要试剂 | 第20-21页 |
| 3.1.5 常用培养基配方和自配的主要试剂 | 第21-23页 |
| 3.2 实验方法 | 第23-38页 |
| 3.2.1 MIGS基因沉默基础载体pMIGS-T的构建方法 | 第23-28页 |
| 3.2.2 矮牵牛PhPDS基因的克隆 | 第28-31页 |
| 3.2.3 矮牵牛PhCHS基因MIGS沉默研究的方法 | 第31-36页 |
| 3.2.4 矮牵牛PhPDS基因MIGS沉默研究的方法 | 第36-38页 |
| 第四章 结果与分析 | 第38-58页 |
| 4.1 MIGS基因沉默基础载体pMIGS-T的构建 | 第38-40页 |
| 4.1.1 拟南芥miR173基因的克隆 | 第38页 |
| 4.1.2 构建基础载体载体pMIGS-T | 第38-40页 |
| 4.2 克隆矮牵牛PhPDS基因 | 第40-42页 |
| 4.2.1 获得矮牵牛PhPDS基因序列全长 | 第40页 |
| 4.2.2 矮牵牛phPDS基因编码蛋白的同源性分析 | 第40-42页 |
| 4.2.3 PhPDS在矮牵牛不同组织中的表达 | 第42页 |
| 4.3 矮牵牛PhCHS基因的MIGS沉默表达研究 | 第42-51页 |
| 4.3.1 植物表达载体pMIGS-CHS的构建 | 第42-43页 |
| 4.3.2 电转化农杆菌 | 第43-44页 |
| 4.3.3 转基因矮牵牛的获得和检测 | 第44-45页 |
| 4.3.4 转基因植株的表型观察 | 第45-46页 |
| 4.3.5 pMIGS-CHS转基因矮牵牛花瓣中CHS基因的表达变化 | 第46-49页 |
| 4.3.6 锚定tasiRNA的剪切位点 | 第49-50页 |
| 4.3.7 pMIGS-CHS转基因花瓣中small RNA深度测序与分析 | 第50-51页 |
| 4.4 矮牵牛PhPDS基因的MIGS沉默表达研究 | 第51-55页 |
| 4.4.1 植物表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 4.4.2 沉默载体电转入农杆菌 | 第52页 |
| 4.4.3 转基因矮牵牛的检测 | 第52-54页 |
| 4.4.4 转基因植株的表型观察 | 第54页 |
| 4.4.5 pMIGS-PDS转基因植株中PDS基因表达变化 | 第54-55页 |
| 4.4.6 pMIGS载体中TEV序列对基因表达的影响 | 第55页 |
| 4.5 超量表达拟南芥miR173对矮牵牛的影响 | 第55-58页 |
| 4.5.1 沉默载体电转入农杆菌 | 第55页 |
| 4.5.2 转基因矮牵牛的获得和检测 | 第55-56页 |
| 4.5.3 转基因植株的表型观察 | 第56-58页 |
| 第五章 讨论 | 第58-62页 |
| 5.1 MIGS沉默技术的优势 | 第58-59页 |
| 5.2 矮牵牛PhPDS基因的克隆和功能分析 | 第59页 |
| 5.3 转基因植株性状变化分析 | 第59页 |
| 5.4 MIGS沉默载体的效率分析 | 第59-60页 |
| 5.5 目的基因的表达变化及锚定剪切位点 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
