| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-22页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 细胞自噬 | 第16-19页 |
| 1.2.1 细胞自噬与肿瘤 | 第16-17页 |
| 1.2.2 细胞自噬调控的分子机制 | 第17-18页 |
| 1.2.3 VPS34在自噬中的调控作用 | 第18-19页 |
| 1.3 GRP78与肿瘤 | 第19-21页 |
| 1.3.1 GRP78在肿瘤发生发展中的作用 | 第19-20页 |
| 1.3.2 GRP78在细胞自噬中的功能研究 | 第20-21页 |
| 1.4 本课题的研究内容与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 过表达GRP78诱导细胞自噬的研究 | 第22-33页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.1 细胞、材料及主要试剂 | 第22页 |
| 2.2.2 主要实验设备与仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.3 主要试剂配制方法 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.3.1 细胞培养、细胞转染 | 第24页 |
| 2.3.2 RNA的提取及cDNA的合成 | 第24-25页 |
| 2.3.3 qRT-PCR检测基因的表达情况 | 第25-26页 |
| 2.3.4 Western blot检测蛋白表达量 | 第26页 |
| 2.3.5 自噬流检测 | 第26-27页 |
| 2.3.6 免疫荧光检测 | 第27页 |
| 2.3.7 MDC染色 | 第27页 |
| 2.3.8 细胞缺糖处理 | 第27页 |
| 2.3.9 统计分析 | 第27页 |
| 2.4 结果与分析 | 第27-31页 |
| 2.4.1 过表达GRP78诱导自噬 | 第27-29页 |
| 2.4.2 自噬抑制剂抑制GRP78引起的自噬流 | 第29页 |
| 2.4.3 敲减GRP78抑制自噬 | 第29-30页 |
| 2.4.4 敲减GRP78降低缺糖诱导的自噬 | 第30-31页 |
| 2.5 小结 | 第31-33页 |
| 第三章 GRP78通过VPS34调控自噬的机制研究 | 第33-43页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第33-34页 |
| 3.2.1 细胞、材料及主要试剂 | 第33页 |
| 3.2.2 主要实验设备与仪器 | 第33-34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第34页 |
| 3.3.2 qRT-PCR和western blot分析 | 第34页 |
| 3.3.3 siRNA转染 | 第34页 |
| 3.3.4 microRNA表达检测及模拟物转染 | 第34-35页 |
| 3.3.5 免疫共沉淀（Co-IP）分析 | 第35页 |
| 3.3.6 GST-Pulldown | 第35-36页 |
| 3.3.7 统计分析 | 第36页 |
| 3.4 结果与分析 | 第36-41页 |
| 3.4.1 GRP78通过VPS34促进自噬 | 第36-37页 |
| 3.4.2 GRP78与VPS34相互作用 | 第37-38页 |
| 3.4.3 GRP78乙酰化促进VPS34表达与自噬 | 第38-40页 |
| 3.4.4 GRP78通过抑制miRNA-143 上调VPS34的表达 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-43页 |
| 第四章 VPS34正反馈上调GRP78的机制研究 | 第43-49页 |
| 4.1 引言 | 第43页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第43页 |
| 4.2.1 细胞、材料及主要试剂 | 第43页 |
| 4.2.2 主要实验设备与仪器 | 第43页 |
| 4.2.3 主要试剂配制方法 | 第43页 |
| 4.3 实验方法 | 第43-44页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第43页 |
| 4.3.2 qRT-PCR和western blot分析 | 第43-44页 |
| 4.3.3 siRNA转染及miRNA检测 | 第44页 |
| 4.3.4 抑制剂处理检测GRP78的降解途径 | 第44页 |
| 4.3.5 免疫共沉淀检测GRP78泛素化 | 第44页 |
| 4.3.6 统计分析 | 第44页 |
| 4.4 结果与分析 | 第44-48页 |
| 4.4.1 过表达VPS34促进GRP78的表达 | 第44-45页 |
| 4.4.2 VPS34通过调节ATF6促进GRP78转录 | 第45-46页 |
| 4.4.3 VPS34抑制GRP78的泛素化降解 | 第46-47页 |
| 4.4.4 敲低VPS34抑制ATF6与GRP78的表达、促进miRNA-143的表达 | 第47-48页 |
| 4.5 小结 | 第48-49页 |
| 总结与展望 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 个人简介及联系方式 | 第61-62页 |
