| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词 | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-30页 |
| 1.1 信号传导及转录激活因子STAT家族研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1.1 STATs蛋白结构与信号通路 | 第12-14页 |
| 1.1.2 STAT家族与肿瘤关系的研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2 内部核糖体进入位点（IRES）研究进展 | 第15-28页 |
| 1.2.1 IRES元件的发现 | 第15-18页 |
| 1.2.2 IRES元件的活性检测 | 第18-19页 |
| 1.2.3 IRES的结构与功能 | 第19-22页 |
| 1.2.4 反式作用因子（ITAFs）调控IRES活性 | 第22-25页 |
| 1.2.5 病毒IRES在联合基因治疗中的应用 | 第25-27页 |
| 1.2.6 细胞IRES与肿瘤关系的研究进展 | 第27-28页 |
| 1.3 课题研究意义 | 第28-29页 |
| 1.4 课题主要研究内容 | 第29-30页 |
| 第二章 STAT家族成员IRES活性的鉴定 | 第30-46页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 材料与方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 质粒、菌株及细胞株 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验试剂和仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.3 溶液和培养基的配制 | 第32页 |
| 2.2.4 双顺反子待检质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.5 分子克隆步骤 | 第33-34页 |
| 2.2.6 细胞培养与转染 | 第34页 |
| 2.2.7 双顺反子报告基因的活性检测 | 第34-35页 |
| 2.2.8 qRT-PCR分析 | 第35-36页 |
| 2.2.9 Western Blot | 第36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-44页 |
| 2.3.1 STAT家族成员 5′-UTR序列与结构分析 | 第36-37页 |
| 2.3.2 STAT家族成员IRES活性的初步鉴定 | 第37-39页 |
| 2.3.3 排除STATs IRES元件含有内部启动子活性 | 第39-40页 |
| 2.3.4 排除双荧光素酶检测质粒含有内部剪切位点 | 第40-41页 |
| 2.3.5 排除核糖体连续翻译机制的干扰作用 | 第41-42页 |
| 2.3.6 双荧光蛋白检测系统对STATs IRES活性的辅助鉴定 | 第42-44页 |
| 2.3.7 STAT家族成员在不同肿瘤细胞中IRES活性比较 | 第44页 |
| 2.4 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 STAT家族成员IRES活性结构域的探究 | 第46-64页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 材料和方法 | 第46-52页 |
| 3.2.1 质粒、菌株及细胞株 | 第46页 |
| 3.2.2 实验试剂和仪器 | 第46页 |
| 3.2.3 溶液和培养基的配制 | 第46页 |
| 3.2.4 IRES二级结构模拟 | 第46页 |
| 3.2.5 STATs IRES逐步截短重组质粒的构建 | 第46-48页 |
| 3.2.6 STATs IRES定点突变重组质粒的构建 | 第48-51页 |
| 3.2.7 分子克隆步骤及细胞培养 | 第51页 |
| 3.2.8 细胞转染以及双荧光素酶活性检测 | 第51-52页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第52-62页 |
| 3.3.1 STAT1 IRES活性中心域的探究 | 第52-53页 |
| 3.3.2 STAT2 IRES活性中心域的探究 | 第53-54页 |
| 3.3.3 STAT4 IRES活性中心域的探究 | 第54-56页 |
| 3.3.4 STAT1 IRES活性区域关键茎环结构的探究 | 第56-59页 |
| 3.3.5 STAT4 IRES活性区域关键茎环结构的探究 | 第59-62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 第四章 细胞应激条件下STAT1和STAT4 IRES元件的功能探究 | 第64-73页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料和方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 质粒及细胞株 | 第64页 |
| 4.2.2 实验试剂和仪器 | 第64-65页 |
| 4.2.3 溶液和培养基的配制 | 第65页 |
| 4.2.4 共聚焦检测STAT家族蛋白的表达与分布 | 第65页 |
| 4.2.5 Western Blot与qRT-PCR | 第65页 |
| 4.2.6 细胞转染及压力处理 | 第65页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第65-71页 |
| 4.3.1 紫杉醇（PTX）处理肝癌细胞后STAT1蛋白及mRNA的表达 | 第65-67页 |
| 4.3.2 紫杉醇（PTX）处理肝癌细胞后STAT4蛋白及mRNA的表达 | 第67-68页 |
| 4.3.3 紫杉醇（PTX）处理肝癌细胞后p-STAT1和p-STAT4蛋白的表达 | 第68-69页 |
| 4.3.4 IRES调控紫杉醇药物压力下肝癌细胞中STAT1和STAT4蛋白的表达 | 第69页 |
| 4.3.5 IRES调控血清饥饿条件下肝癌细胞中STAT1和STAT4蛋白的表达 | 第69-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 第五章 STAT1和STAT4 IRES元件所需的反式作用因子的探究 | 第73-84页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 材料和方法 | 第73-76页 |
| 5.2.1 质粒及细胞株 | 第73页 |
| 5.2.2 实验试剂和仪器 | 第73-74页 |
| 5.2.3 溶液和培养基的配制 | 第74页 |
| 5.2.4 RNA-蛋白免疫共沉淀实验 | 第74-75页 |
| 5.2.5 Western Blot检测胞质胞核蛋白的表达 | 第75页 |
| 5.2.6 siRNA干扰技术 | 第75-76页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第76-83页 |
| 5.3.1 STAT1和STAT4的IRES元件与四种ITAFs的结合 | 第76-77页 |
| 5.3.2 四种ITAFs正调控STAT1和STAT4的IRES元件 | 第77-79页 |
| 5.3.3 药物压力条件下Bel7402细胞中四种ITAFs的表达与分布 | 第79-80页 |
| 5.3.4 血清饥饿条件下Bel7402细胞中四种ITAFs的表达与分布 | 第80-81页 |
| 5.3.5 STAT1和STAT4的IRES元件与四种ITAFs结合位点的预测 | 第81-83页 |
| 5.4 本章小结 | 第83-84页 |
| 第六章 基于STAT1和STAT4 IRES元件对细胞IRES结构的初探 | 第84-92页 |
| 6.1 引言 | 第84页 |
| 6.2 材料和方法 | 第84-85页 |
| 6.2.1 质粒及细胞株 | 第84页 |
| 6.2.2 实验试剂和仪器 | 第84-85页 |
| 6.2.3 溶液和培养基的配制 | 第85页 |
| 6.2.4 质粒构建 | 第85页 |
| 6.2.5 分子克隆步骤 | 第85页 |
| 6.2.6 细胞培养和转染及双荧光素酶的活性检测 | 第85页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第85-91页 |
| 6.3.1 STAT1与已鉴定的IRES元件的结构对比 | 第85-87页 |
| 6.3.2 STAT4与已鉴定的IRES元件的结构对比 | 第87-88页 |
| 6.3.3 STAT1与MDR15′-UTR的结构对比 | 第88-89页 |
| 6.3.4 STAT4与RRBP1、CDX2和AHR 5′-UTRs的结构对比 | 第89-90页 |
| 6.3.5 MDR1、RRBP1、CDX2和AHR IRES活性的鉴定 | 第90-91页 |
| 6.4 本章小结 | 第91-92页 |
| 主要结论与展望 | 第92-94页 |
| 主要结论 | 第92-93页 |
| 展望 | 第93-94页 |
| 论文主要创新点 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-102页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第102页 |
