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酿酒酵母基因组中与邻苯二甲酸单乙基己基酯敏感性相关的基因筛选

摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 绪论第7-13页
    1.1 邻苯二甲酸单乙基己基酯第7-8页
        1.1.1 邻苯二甲酸单乙基己基酯简介第7页
        1.1.2 邻苯二甲酸酯的研究第7-8页
    1.2 酿酒酵母细胞第8-10页
        1.2.1 酿酒酵母作为模式生物第8-9页
        1.2.2 酿酒酵母全基因组水平上的适应性应答第9页
        1.2.3 酿酒酵母的渗透适应性第9-10页
    1.3 酿酒酵母的VPS基因家族第10-11页
    1.4 酿酒酵母麦角固醇生物合成途径第11-12页
    1.5 本课题的研究内容和意义第12-13页
第二章 实验材料与方法第13-20页
    2.1 实验材料第13-15页
        2.1.1 主要试剂药品第13页
        2.1.2 实验菌株和质粒第13-14页
        2.1.3 主要仪器设备第14页
        2.1.4 培养基的配制第14-15页
        2.1.5 主要溶液配制第15页
    2.2 实验方法第15-20页
        2.2.1 玻璃珠法提取酿酒酵母基因组DNA第15-16页
        2.2.2 PCR扩增DNA片段第16页
        2.2.3 倍比稀释法表型分析第16页
        2.2.4 酿酒酵母缺失株文库筛选第16-17页
        2.2.5 HPLC检测酿酒酵母细胞内MEHP第17页
        2.2.6 HPLC检测酿酒酵母细胞麦角固醇第17-18页
        2.2.7 酿酒酵母质粒的转化第18页
        2.2.8 β-半乳糖苷酶(LacZ)活性的测定第18-20页
第三章 结果与讨论第20-38页
    3.1 酿酒酵母基因缺失菌株文库筛选第20-28页
        3.1.1 酿酒酵母文库筛选所用MEHP浓度和背景菌的确定第20页
        3.1.2 酿酒酵母MEHP敏感缺失株的筛选第20-21页
        3.1.3 酿酒酵母单基因缺失株对MEHP敏感程度的表型分析第21-28页
    3.2 对MEHP敏感的酿酒酵母单基因缺失株的胞内MEHP含量的测定第28-33页
        3.2.1 缺失导致胞内MEHP含量显著高于野生型四倍的基因功能分析第30-31页
        3.2.2 缺失后导致胞内MEHP含量与野生型相比无显著性差异的基因功能分析第31-32页
        3.2.3 缺失致导致胞内MEHP含量显著低于野生型三倍的基因功能分析第32-33页
    3.3 MEHP敏感性与麦角固醇生物合成关系的探究第33-36页
        3.3.1 erg敏感表型的抑制第33-34页
        3.3.2 96株MEHP敏感基因缺失株细胞麦角固醇含量的测定与分析第34-36页
    3.4 MEHP敏感性与钙离子/钙调磷酸酯酶途径关系的探究第36-38页
        3.4.1 MEHP敏感缺失株的钙离子表型验证第36-37页
        3.4.2 MEHP对钙离子/钙调磷酸酯酶途径相关基因转录水平的影响第37-38页
主要结论与展望第38-39页
    主要结论第38页
    展望第38-39页
致谢第39-40页
参考文献第40-44页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第44页

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