| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 引言 | 第7页 |
| 1.2 内含肽的发现 | 第7页 |
| 1.3 内含肽的特征 | 第7-9页 |
| 1.3.1 内含肽的分布及分类 | 第7-8页 |
| 1.3.2 内含肽的结构特征 | 第8-9页 |
| 1.4 内含肽的自我剪接机制 | 第9-10页 |
| 1.5 内含肽的应用 | 第10-13页 |
| 1.5.1 蛋白纯化 | 第10-12页 |
| 1.5.2 毒素蛋白生产 | 第12页 |
| 1.5.3 蛋白环化 | 第12-13页 |
| 1.5.4 蛋白连接 | 第13页 |
| 1.6 立题依据及研究内容 | 第13-15页 |
| 1.6.1 立题意义 | 第13-14页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-27页 |
| 2.1 材料 | 第15-16页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 实验仪器和设备 | 第16页 |
| 2.2 蛋白亲和纯化系统的构建 | 第16-18页 |
| 2.2.1 I_N亲和配基片段的结构设计 | 第17-18页 |
| 2.2.2 I_C融合蛋白片段的结构设计 | 第18页 |
| 2.3 重组菌株的构建 | 第18-20页 |
| 2.3.1 I_N亲和配基片段重组菌株E. coli BL21(DE3)/pET-21b-I_N的构建 | 第18-20页 |
| 2.3.2 I_C融合蛋白片段重组菌株E. coli BL21(DE3)/pET-28a-I_C-GFP-M的构建 | 第20页 |
| 2.4 亲和纯化系统中蛋白片段的表达和分离纯化 | 第20-21页 |
| 2.4.1 I_N亲和配基片段和I_C融合蛋白片段的诱导表达 | 第20-21页 |
| 2.4.2 I_N亲和配基片段和I_C融合蛋白片段的亲和纯化 | 第21页 |
| 2.5 I_N和I_C-GFP片段的柱外断裂实验 | 第21-23页 |
| 2.5.1 样品预处理 | 第21-22页 |
| 2.5.2 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 | 第22页 |
| 2.5.3 不同条件下的I_N和I_C-GFP两片段之间的断裂反应 | 第22-23页 |
| 2.5.4 断裂速率的计算 | 第23页 |
| 2.5.5 Zn~(2+)对断裂反应的抑制作用 | 第23页 |
| 2.6 I_N亲和层析介质的制备及其层析性能研究 | 第23-25页 |
| 2.6.1 I_N亲和层析介质的制备 | 第23-24页 |
| 2.6.2 I_N亲和层析介质性能研究 | 第24-25页 |
| 2.7 I_N亲和层析介质纯化性能研究 | 第25-27页 |
| 2.7.1 I_N亲和层析介质的亲和层析过程 | 第25页 |
| 2.7.2 I_N亲和层析介质在模型蛋白纯化中的应用 | 第25-26页 |
| 2.7.3 I_N亲和层析介质的再生和重复使用 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-45页 |
| 3.1 重组菌的构建 | 第27-29页 |
| 3.1.1 I_N亲和配基片段重组菌株E. coli BL21(DE3)/pET-21b-I_N的构建 | 第27-28页 |
| 3.1.2 I_C融合蛋白片段重组菌株E. coli BL21(DE3)/pET-28a-I_C-GFP-M的构建 | 第28-29页 |
| 3.2 亲和纯化系统中目标蛋白片段的表达和分离纯化 | 第29-32页 |
| 3.2.1 亲和配基片段的诱导表达和分离纯化 | 第29-31页 |
| 3.2.2 I_C融合蛋白片段的诱导表达和分离纯化 | 第31-32页 |
| 3.3 I_N亲和配基片段和I_C融合蛋白片段的柱外断裂实验 | 第32-39页 |
| 3.3.1 突变前后I_N亲和配基片段的C端断裂反应 | 第32-33页 |
| 3.3.2 不同温度条件下的断裂反应 | 第33-35页 |
| 3.3.3 不同pH条件下的断裂反应 | 第35-37页 |
| 3.3.4 不同DTT浓度下的断裂反应 | 第37-38页 |
| 3.3.5 不同浓度Zn~(2+)对断裂反应的抑制作用 | 第38-39页 |
| 3.4 I_N亲和层析介质的制备及其层析性能研究 | 第39-43页 |
| 3.4.1 I_N亲和层析介质的制备 | 第39-40页 |
| 3.4.2 I_N亲和配基片段和I_C-GFP-M融合蛋白片段C端断裂实验 | 第40-41页 |
| 3.4.3 不同pH条件下的静态吸附 | 第41页 |
| 3.4.4 动态吸附载量测定 | 第41-43页 |
| 3.5 I_N亲和层析介质对I_C-GFP蛋白纯化性能研究 | 第43-45页 |
| 主要结论与展望 | 第45-47页 |
| 主要结论 | 第45-46页 |
| 展望 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第52页 |
