| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 前言 | 第10-19页 |
| 第一部分 重组OMVs的制备及鉴定 | 第19-53页 |
| 1 引言 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-48页 |
| 3.1 重组质粒的构建与鉴定 | 第40-42页 |
| 3.2 trx-E7、ClyA-E7、ClyA-GFP融合蛋白的诱导表达 | 第42-43页 |
| 3.3 Western blot鉴定 | 第43-45页 |
| 3.4 OMVs大量制备的工艺摸索 | 第45页 |
| 3.5 透射电子显微镜观察 | 第45-46页 |
| 3.6 粒度扫描分析 | 第46-47页 |
| 3.7 OMVs转染GFP真核质粒 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 4.1 OMVs作为疫苗载体的应用潜能 | 第48页 |
| 4.2 E.coli来源的OMVs大量制备技术的建立 | 第48-49页 |
| 4.3 提高OMVs的产量 | 第49-50页 |
| 4.4 硫氧还蛋白(trx)及ClyA在OMVs中作为牵引序列的应用 | 第50页 |
| 4.5 质粒可通过电穿孔的方式转染进入OMVs中 | 第50-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 第二部分 基因工程改造的OMVs在抗原递呈细胞中的研究 | 第53-69页 |
| 1 引言 | 第53-55页 |
| 2 材料和方法 | 第55-59页 |
| 2.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 2.2 实验方法 | 第56-59页 |
| 3 结果与分析 | 第59-65页 |
| 3.1 BMDCs体外培养 | 第59-60页 |
| 3.2 Raw264.7细胞摄取GFP-OMVs与Dio-OMVs | 第60-61页 |
| 3.3 BMDCs摄取OMVs的效率及动力学 | 第61页 |
| 3.4 OMVs囊泡结构完整性对其被BMDCs摄取效率的影响 | 第61-62页 |
| 3.5 OMVs促进BMDCs成熟 | 第62-64页 |
| 3.6 OMVs进入BMDCs的方式 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| 4.1 树突状细胞在抗肿瘤免疫应答中的作用 | 第65页 |
| 4.2 肿瘤微环境中DCs受到抑制作用 | 第65-66页 |
| 4.3 OMVs将抗原递送至APCs | 第66-67页 |
| 4.4 OMVs进入细胞的方式 | 第67-68页 |
| 5 小结 | 第68-69页 |
| 第三部分 重组OMVs对小鼠TC-1移植肿瘤模型的干预研究 | 第69-90页 |
| 1 引言 | 第69-71页 |
| 2 材料和方法 | 第71-78页 |
| 2.1 实验材料 | 第71-72页 |
| 2.2 实验方法 | 第72-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-84页 |
| 3.1 重组trx-E7 OMVs激发抗原特异性的细胞免疫应答 | 第78-79页 |
| 3.2 重组trx-E7 OMVs激发抗原特异性的体液免疫应答 | 第79页 |
| 3.3 trx-E7 OMVs疫苗对小鼠肿瘤模型的治疗性免疫干预效果 | 第79-81页 |
| 3.4 不同剂量trx-E7 OMVs、ClyA-E7 OMVs对肿瘤的治疗性免疫干预 | 第81-82页 |
| 3.5 trx-E7 OMVs在小鼠肿瘤模型中治疗性免疫干预对CTL应答的影响 | 第82页 |
| 3.6 trx-E7 OMVs在小鼠肿瘤模型中治疗性免疫干预对Th应答的影响 | 第82-84页 |
| 4 讨论 | 第84-89页 |
| 4.1 由OMVs呈递抗原大大增强抗原的免疫原性 | 第84页 |
| 4.2 trx-E7 OMVs对肿瘤生长的干预及激发的免疫应答 | 第84-85页 |
| 4.3 分别由trx、ClyA引导E7表现出对肿瘤生长干预的不同效果分析 | 第85-86页 |
| 4.4 OMVs作为疫苗递送载体可能存在的问题 | 第86页 |
| 4.5 OMVs在临床实际应用中毒性的调节 | 第86-87页 |
| 4.6 OMVs可能进行的其他修饰方式 | 第87-89页 |
| 5 小结 | 第89-90页 |
| 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 附录一 主要缩略词表 | 第100-102页 |
| 附录二 常用溶液的配制 | 第102-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
| 个人简历 | 第108-111页 |
