| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1 农药的微生物降解 | 第13-17页 |
| 1.0 农药降解菌的富集分离 | 第13-14页 |
| 1.1 降解农药的微生物类群 | 第14页 |
| 1.2 微生物降解农药的机理 | 第14-15页 |
| 1.3 影响微生物降解农药的因素 | 第15-16页 |
| 1.4 国内外农药的微生物降解研究进展 | 第16-17页 |
| 2 酰胺酶 | 第17-19页 |
| 2.1 酰胺酶的分类 | 第17-18页 |
| 2.2 酰胺酶的催化机制 | 第18页 |
| 2.3 几种除草剂的酰胺水解酶的研究 | 第18-19页 |
| 3 睾丸酮丛毛单胞菌在环境污染物降解方面的研究进展 | 第19页 |
| 4 炔苯酰草胺的概况 | 第19-21页 |
| 4.1 炔苯酰草胺简介 | 第19-20页 |
| 4.2 炔苯酰草胺的理化性质 | 第20页 |
| 4.3 炔苯酰草胺的毒性 | 第20页 |
| 4.4 炔苯酰草胺的生产使用情况 | 第20-21页 |
| 5 炔苯酰草胺的降解研究进展 | 第21-24页 |
| 5.1 炔苯酰草胺的化学降解 | 第21-22页 |
| 5.2 炔苯酰草胺的在土壤中的降解 | 第22-23页 |
| 5.3 炔苯酰草胺的在植物体内的降解 | 第23-24页 |
| 5.4 炔苯酰草胺的在动物体内的降解 | 第24页 |
| 5.5 炔苯酰草胺的微生物降解 | 第24页 |
| 6 研究的内容和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 炔苯酰草胺降解菌的分离、鉴定及其生长特性研究 | 第25-43页 |
| 第一节 炔苯酰草胺降解菌的分离、鉴定 | 第25-36页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| 1.1 供试土样、农药、试剂、菌株、仪器 | 第25页 |
| 1.2 炔苯酰草胺降解菌的富集与分离 | 第25-26页 |
| 1.3 降解菌株对炔苯酰草胺降解能力的定量分析 | 第26页 |
| 1.4 菌体生长量的测定 | 第26页 |
| 1.5 降解菌株的鉴定 | 第26页 |
| 1.6 降解菌株16S rRNA序列分析 | 第26-29页 |
| 1.7 降解菌株系统发育地位的确定 | 第29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-36页 |
| 2.1 炔苯酰草胺的定量分析 | 第29-31页 |
| 2.2 炔苯酰草胺降解菌的富集与分离 | 第31页 |
| 2.3 菌株W1的鉴定 | 第31-36页 |
| 第二节 菌株W1生长特性的研究 | 第36-41页 |
| 1 材料与方法 | 第36-37页 |
| 1.1 供试菌株及培养基 | 第36页 |
| 1.2 菌体生长量的测定 | 第36页 |
| 1.3 种子液的制备 | 第36页 |
| 1.4 不同环境条件对菌株W1生长的影响 | 第36-37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 2.1 温度对菌株W1生长的影响 | 第37-38页 |
| 2.2 初始pH对菌株W1生长的影响 | 第38页 |
| 2.3 通气量对菌株W1生长的影响 | 第38-39页 |
| 2.4 NaCl浓度对菌株W1生长的影响 | 第39页 |
| 2.5 菌株W1对不同碳源的利用 | 第39-40页 |
| 2.6 菌株W1的氮源利用情况 | 第40-41页 |
| 3 讨论 | 第41页 |
| 本章小结 | 第41-43页 |
| 第三章 炔苯酰草胺降解菌W1降解特性、代谢途径的研究 | 第43-51页 |
| 1 材料与方法 | 第43-44页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第43页 |
| 1.2 菌株W1种子液的制备 | 第43页 |
| 1.3 炔苯酰草胺的提取与检测 | 第43页 |
| 1.4 菌株W1对炔苯酰草胺降解特性研究 | 第43-44页 |
| 2 结果与分析 | 第44-49页 |
| 2.1 菌株W1以炔苯酰草胺为碳源的降解情况 | 第44-45页 |
| 2.2 代谢产物的鉴定及代谢途径推测 | 第45-47页 |
| 2.3 温度对菌株W1降解炔苯酰草胺的影响 | 第47-48页 |
| 2.4 pH值对菌株W1降解炔苯酰草胺的影响 | 第48-49页 |
| 2.5 接种量对菌株W1降解炔苯酰草胺的影响 | 第49页 |
| 2.6 菌株W1对其他含酰胺键的除草剂的降解 | 第49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 炔苯酰草胺酰胺水解酶基因camH的克隆与表达和酶学特性研究 | 第51-71页 |
| 第一节 炔苯酰草胺酰胺水解酶基因camH的克隆 | 第51-57页 |
| 1 材料与方法 | 第51-54页 |
| 1.1 菌株、培养基与试剂 | 第51页 |
| 1.2 鸟枪法基因文库构建示意图 | 第51页 |
| 1.3 菌体总DNA的提取 | 第51页 |
| 1.4 染色体总DNA的Sau3AⅠ酶切与片段回收 | 第51-52页 |
| 1.5 酶连 | 第52页 |
| 1.6 高效感受态细胞的制备 | 第52页 |
| 1.7 酶连产物的转化与阳性克隆的筛选 | 第52页 |
| 1.8 质粒DNA的提取 | 第52-53页 |
| 1.9 阳性克隆子降解炔苯酰草胺的检测 | 第53-54页 |
| 1.10 序列测定与分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-57页 |
| 2.1 菌株W1总DNA的提取与Sau3AⅠ酶切 | 第54-55页 |
| 2.2 阳性克隆子的筛选 | 第55页 |
| 2.3 基因序列测定与分析 | 第55-56页 |
| 2.4 camH编码蛋白序列分析 | 第56-57页 |
| 第二节 酰胺水解酶基因camH的表达与纯化 | 第57-65页 |
| 1 材料与方法 | 第57-62页 |
| 1.1 菌株、培养基及试剂 | 第57页 |
| 1.2 炔苯酰草胺酰胺水解酶基因camH的PCR扩增及T/A克隆 | 第57-59页 |
| 1.3 表达载体pET29a-camH的构建 | 第59-61页 |
| 1.4 炔苯酰草胺酰胺水解酶基因camH的表达与纯化 | 第61-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-65页 |
| 2.1 炔苯酰草胺酰胺水解酶基因camH的PCR扩增及T/A克隆 | 第62-63页 |
| 2.2 表达载体构建 | 第63-64页 |
| 2.3 camH在大肠杆菌中表达、纯化的SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| 第三节 炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH的酶学性质研究 | 第65-69页 |
| 1材料与方法 | 第65-66页 |
| 1.1 试剂 | 第65页 |
| 1.2 CamH活力测定 | 第65页 |
| 1.3 温度和pH值对炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH活性和稳定性的影响 | 第65-66页 |
| 1.4 金属离子对炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH活性的影响 | 第66页 |
| 1.5 炔苯酰草胺酰胺水解酶对其它含有酰胺键的化合物的活性测定 | 第66页 |
| 1.6 炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH米氏常数(K_m)和最大反应速率(V_(max))的测定 | 第66页 |
| 2 结果与分析 | 第66-69页 |
| 2.1 温度和pH值对炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH活性和稳定性的影响 | 第66-67页 |
| 2.2 金属离子和化学试剂对炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH活性的影响 | 第67页 |
| 2.3 炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH对其含酰胺键化合物的酶活测定 | 第67页 |
| 2.4 炔苯酰草胺酰胺水解酶CamH的米氏常数(Km)和最大反应速率(V_(max)) | 第67-69页 |
| 3 讨论 | 第69页 |
| 本章小结 | 第69-71页 |
| 全文总结 | 第71-73页 |
| 1 结论 | 第71页 |
| 2 主要创新点 | 第71页 |
| 3 不足与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 | 第79-85页 |
| 附录一 培养基及试剂配方 | 第79-81页 |
| 附录二 菌株W1的16S rRNA基因序列 | 第81-82页 |
| 附录三 阳性克隆子测序结果 | 第82-84页 |
| 附录四 炔苯酰草胺水解酶基因camH的核酸序列 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-87页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第87页 |
| 攻读硕士学位期间申请的国家发明专利 | 第87页 |
