| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| ·国内外文献综述 | 第13-18页 |
| ·细胞周期蛋白家族研究进展 | 第13-15页 |
| ·甲壳动物中细胞周期蛋白的研究 | 第15-16页 |
| ·细胞周期蛋白Y和E的研究现状 | 第16-18页 |
| ·研究背景、意义、研究内容及技术路线 | 第18-21页 |
| ·课题来源 | 第18页 |
| ·研究背景和意义 | 第18-19页 |
| ·主要的研究内容 | 第19页 |
| ·技术路线 | 第19-21页 |
| 第二章 斑节对虾细胞周期蛋白Y基因(Pm-cyclin Y)的分子克隆 | 第21-36页 |
| ·前言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·实验动物 | 第21-22页 |
| ·主要试剂和培养基配制 | 第22-23页 |
| ·实验菌种 | 第23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·实验内容 | 第23-27页 |
| ·RACE技术克隆Pm-cyclin Y | 第23-27页 |
| ·实验用品预处理 | 第23页 |
| ·斑节对虾卵巢总RNA提取 | 第23-24页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| ·反转录cDNA质量检测 | 第24页 |
| ·斑节对虾cyclin Y的分子克隆 | 第24-27页 |
| ·斑节对虾cyclin Y的生物信息学分析 | 第27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-35页 |
| ·斑节对虾卵巢样品总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·逆转录cDNA质量检测 | 第28-29页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第29-35页 |
| ·小结与讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 斑节对虾细胞周期蛋白Y和E的mRNA水平表达分析 | 第36-44页 |
| ·前言 | 第36-37页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·实验动物准备工作 | 第37页 |
| ·主要仪器和化学试剂 | 第37-38页 |
| ·实验内容 | 第38-39页 |
| ·斑节对虾各组织RNA提取及cDNA合成 | 第38页 |
| ·反转录cDNA质量检测 | 第38页 |
| ·设计及筛选最优qRT-PCR引物 | 第38页 |
| ·qRT-PCR反应 | 第38-39页 |
| ·统计学分析 | 第39页 |
| ·实验结果 | 第39-42页 |
| ·卵巢发育各期Pm-cyclin Y的qRT-PCR结果 | 第39-40页 |
| ·各组织Pm-cyclin Y的qRT-PCR结果 | 第40-41页 |
| ·卵巢发育各期Pm-cyclin E的qRT-PCR结果 | 第41-42页 |
| ·斑节对虾卵巢发育各期 cyclin E 的 q RT-PCR 结果 | 第42页 |
| ·小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 斑节对虾细胞周期蛋白Y和E的原核表达分析 | 第44-56页 |
| ·前言 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第45-47页 |
| ·实验动物 | 第45-46页 |
| ·所需主要试剂及仪器 | 第46-47页 |
| ·实验内容 | 第47-52页 |
| ·斑节对虾卵巢RNA制备及质量检测 | 第47页 |
| ·cDNA模板合成及检测 | 第47-48页 |
| ·质粒和cDNA模板的双酶切 | 第48页 |
| ·构建 Pm-cyclin Y 的重组质粒 | 第48-49页 |
| ·Pm-cyclin Y 的重组质粒的表达 | 第49-51页 |
| ·Pm-cyclin Y 的重组蛋白的纯化 | 第51页 |
| ·Pm-cyclin E 的重组表达及蛋白纯化 | 第51页 |
| ·Pm-cyclin Y 和 E 多克隆抗体制备 | 第51-52页 |
| ·实验结果 | 第52-55页 |
| ·基因重组质粒双酶切检测 | 第52页 |
| ·Pm-cyclin Y 基因重组蛋白诱导表达 | 第52-53页 |
| ·Pm-cyclin Y基因重组蛋白纯化结果 | 第53页 |
| ·Pm-cyclin E的原核表达及蛋白纯化结果 | 第53-55页 |
| ·小结与讨论 | 第55-56页 |
| 第五章 斑节对虾周期蛋白Y和E的免疫印迹与免疫组织化学分析 | 第56-64页 |
| ·前言 | 第56-57页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·实验动物 | 第57页 |
| ·所需主要试剂及仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·实验用虾预处理 | 第57-58页 |
| ·制备斑节对虾卵巢发育各期组织石蜡切片 | 第58页 |
| ·免疫组织化学实验 | 第58-59页 |
| ·实验结果与分析 | 第59-62页 |
| ·卵巢发育各期Pm-cyclin Y免疫组化结果 | 第59-60页 |
| ·卵巢发育各期Pm-cyclin E免疫组化结果 | 第60-62页 |
| ·小结与讨论 | 第62-64页 |
| 总结 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74-75页 |
| 缩略词表 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
