| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 引言 | 第13-15页 |
| 1 实验方案设计 | 第15-20页 |
| ·实验的目的及意义 | 第15页 |
| ·研究内容 | 第15-16页 |
| ·miR-128的靶点确认分析 | 第15页 |
| ·miR-128及PFKL在肺癌细胞中的初始表达分析 | 第15页 |
| ·miR-128对PFKL的表达调控分析 | 第15页 |
| ·异常表达miR-128或PFKL对细胞生长以及克隆形成的影响 | 第15-16页 |
| ·临床样本分析 | 第16页 |
| ·PFKL表达量与患者总体生存率的相关性分析 | 第16页 |
| ·异常表达miR-128或PFKL对细胞葡萄糖摄入及乳酸生成的影响 | 第16页 |
| ·异常表达miR-128或PFKL对细胞内ATP含量的影响 | 第16页 |
| ·miR-128作用于PFKL的机制分析 | 第16页 |
| ·技术路线图 | 第16-17页 |
| ·实验方案 | 第17-20页 |
| ·肺正常上皮细胞及肺癌细胞的培养 | 第17-18页 |
| ·细胞总RNA提取及qRT-PCR | 第18页 |
| ·双荧光素酶报告分析 | 第18页 |
| ·miR-128对PFKL的蛋白调控分析 | 第18页 |
| ·MTT分析 | 第18页 |
| ·结晶紫染色法 | 第18页 |
| ·临床血液样本中PFKL及miR-128表达分析 | 第18页 |
| ·KM-plot分析 | 第18页 |
| ·葡萄糖摄入量及乳酸生成量的测定 | 第18页 |
| ·ATP含量的测定 | 第18-19页 |
| ·miR-128调控PFKL的作用机制分析 | 第19页 |
| ·数据总结分析 | 第19-20页 |
| 2 实验材料与方法 | 第20-42页 |
| ·实验材料 | 第20-30页 |
| ·主要实验仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂耗材 | 第21-24页 |
| ·实验细胞株、菌株及载体 | 第24页 |
| ·肺癌患者及健康志愿者血液样本收集 | 第24页 |
| ·主要试剂及配制 | 第24-30页 |
| ·实验方法 | 第30-42页 |
| ·细胞培养和传代 | 第30页 |
| ·细胞复苏 | 第30-31页 |
| ·细胞冻存 | 第31页 |
| ·细胞计数 | 第31页 |
| ·合成RNAs | 第31页 |
| ·转染RNAs | 第31-32页 |
| ·总RNA提取 | 第32页 |
| ·RNA纯度分析 | 第32页 |
| ·逆转录反应 | 第32-33页 |
| ·质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·无内毒素质粒提取 | 第35页 |
| ·双荧光素酶报告分析相关操作 | 第35-36页 |
| ·普通PCR和qRT-PCR | 第36-38页 |
| ·Western blot检测蛋白表达 | 第38-39页 |
| ·MTT分析细胞生长情况 | 第39-40页 |
| ·细胞克隆形成实验 | 第40页 |
| ·临床血液样本中PFKL及miR-128表达测定 | 第40页 |
| ·KM-plot分析相关操作 | 第40页 |
| ·细胞葡萄糖摄入量的测定 | 第40页 |
| ·细胞内乳酸含量的测定 | 第40页 |
| ·细胞内ATP含量测定 | 第40页 |
| ·miR-128调控PFKL的机制分析 | 第40页 |
| ·统计方法 | 第40-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-59页 |
| ·筛选出PFKL相关的miRNA | 第42页 |
| ·成功构建PFKL 3’UTR野生型及突变型载体 | 第42-43页 |
| ·PFKL是miR-128的直接靶点 | 第43-45页 |
| ·PFKL在NCI-H460中相对高表达,miR-128在NCI-H1299中相对高表达 | 第45页 |
| ·成功构建PFKL过表达载体 | 第45-46页 |
| ·miR-128抑制PFKL在mRNA及蛋白水平的表达 | 第46-49页 |
| ·过表达PFKL能够补救由miR-128引起的PFKL mRNA水平降低 | 第49-50页 |
| ·过表达PFKL能够补救由miR-128引起的PFKL蛋白水平的降低 | 第50-51页 |
| ·miR-128能够抑制肺癌细胞的生长及克隆的形成 | 第51-52页 |
| ·miR-128的表达与PFKL的表达呈负相关 | 第52-54页 |
| ·miR-128介导代谢方式的转变 | 第54-56页 |
| ·miR-128通过AKT信号通路来调控PFKL | 第56-57页 |
| ·异常表达miR-128对AKT在mRNA水平的表达无明显影响 | 第57-59页 |
| 4 结论 | 第59-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 附录A 缩写表 | 第66-68页 |
| 附录B 综述 | 第68-80页 |
| 参考文献 | 第75-80页 |
| 在学研究成果 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
