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氧化固醇结合蛋白相关蛋白4L(ORP4L)在巨噬细胞中维持钙离子依赖的Bcl-XL表达

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
第一章 前言第9-19页
   ·动脉粥样硬化第9页
   ·氧化固醇第9-11页
   ·氧化固醇结合蛋白家族第11-12页
   ·ORP4L的结构和功能第12页
   ·Bcl-XL抗凋亡蛋白第12-15页
   ·ORP4L与Ca~(2+)释放第15-17页
   ·研究目的、意义与创新点第17-19页
     ·研究目的第17页
     ·研究意义和创新点第17-19页
第二章 实验材料、实验仪器与试剂第19-24页
   ·实验材料第19-20页
     ·细胞和实验动物第19页
     ·主要试剂第19-20页
     ·引物合成第20页
   ·实验仪器第20-21页
   ·主要试剂配制第21-24页
     ·细胞培养相关试剂第21页
     ·小鼠腹腔巨噬细胞分离相关试剂第21页
     ·蛋白样品制备相关试剂第21-22页
     ·SDS电泳相关试剂第22页
     ·Western blotting所需试剂配制第22-23页
     ·Ca~(2+)测定相关试剂第23-24页
第三章 实验方法第24-34页
   ·巨噬细胞Ca~(2+)信号检测相关实验第24-28页
     ·从ORP4L-/-小鼠及野生型小鼠分离腹腔巨噬细胞第24页
     ·小鼠腹腔巨噬细胞PLC活性的测定第24-25页
     ·统计学处理方法第25页
     ·小鼠腹腔巨噬细胞IP3活性的测定第25-26页
     ·小鼠腹腔巨噬细胞Ca~(2+)浓度的检测第26页
     ·Raw264.7 细胞的复苏第26-27页
     ·Raw264.7 细胞的传代和冻存第27页
     ·Raw264.7 细胞的转染第27页
     ·RAW264.7 巨噬细胞PLC活性的测定第27页
     ·RAW264.7 巨噬细胞IP3活性的测定第27页
     ·RAW264.7 巨噬细胞Ca~(2+)活性的测定第27-28页
   ·ORP4L调控Bcl-XL相关实验第28-34页
     ·小鼠腹腔巨噬细胞的蛋白样品制备第28页
     ·Western blotting分析第28-29页
     ·提取RNA和逆转录第29-31页
     ·实时定量PCR(real-time quantitative PCR)第31-32页
     ·流式细胞仪检测小鼠腹腔巨噬细胞的凋亡第32页
     ·流式细胞仪检测Raw264.7 细胞的凋亡第32-34页
第四章 实验结果及分析第34-50页
   ·ORP4L在巨噬细胞中介导Ca~(2+)释放第34-38页
     ·ORP4L沉默抑制PLC活性第34页
     ·ORP4L 沉默对 IP3 产生的影响第34-35页
     ·ORP4L 沉默影响 ER Ca~(2+)的释放第35-36页
     ·过表达 ORP4L 对 PLC 活性的影响第36-37页
     ·过表达ORP4L对IP3产生的影响第37页
     ·过表达ORP4L对ER Ca~(2+)释放的影响第37-38页
   ·ORP4L调控Bcl-XL蛋白表达第38-41页
     ·ORP4L沉默对Bcl-XL蛋白的影响第38-39页
     ·过表达ORP4L对Bcl-XL蛋白的影响第39-40页
     ·RAW264.7 细胞中ORP4L对Bcl-XL蛋白的影响第40-41页
   ·ORP4L调控Bcl-XL表达依赖钙离子信号通路第41-44页
     ·离子霉素刺激条件的摸索第41-42页
     ·离子霉素逆转ORP4L沉默对Bcl-XL的表达的下调第42-44页
   ·ORP4L调控Bcl-XL表达依赖CREB第44-46页
     ·CREB抑制剂作用条件的摸索第44-45页
     ·ORP4L通过Ca~(2+)依赖的CREB信号通路调控Bcl-XL第45-46页
   ·ORP4L通过介导Ca~(2+)释放调控Bcl-XL蛋白表达第46-50页
     ·钙离子刺激剂对Bcl-XL表达的影响第46-48页
     ·ORP4L调控巨噬细胞凋亡第48-50页
第五章 讨论第50-53页
参考文献第53-60页
附录第60-62页
致谢第62页

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