| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词与专有名词明细 | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶概述 | 第11-14页 |
| ·木瓜蛋白酶 | 第11-13页 |
| ·豆类天冬氨酸蛋白内切酶 | 第13页 |
| ·天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶 | 第13-14页 |
| ·钙依赖的半胱氨酸蛋白酶 | 第14页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的生理作用 | 第14-18页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶与PCD过程 | 第14-17页 |
| ·细胞程序性死亡(PCD)概述 | 第14-16页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶在PCD中的作用 | 第16-17页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第17-18页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶抑制剂概述 | 第17-18页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶抑制剂在PCD中的作用 | 第18页 |
| ·实验室的前期工作进展 | 第18页 |
| ·研究意义 | 第18-21页 |
| 2 半胱氨酸蛋白酶基因序列分析及组织表达特异性分析 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·实验试剂 | 第21页 |
| ·实验仪器 | 第21页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因的生物信息学分析 | 第21-22页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因的序列分析 | 第21-22页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶系统进化树的构建 | 第22页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因的组织表达特异性分析 | 第22-24页 |
| ·毛果杨RNA的提取 | 第22页 |
| ·RNA反转录获得cDNA | 第22-23页 |
| ·毛果杨半胱氨酸蛋白酶基因组织表达特异性分析 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-30页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的序列分析 | 第24-26页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的氨基酸序列比对及系统进化树的构建 | 第26-28页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的组织表达特异性分析 | 第28-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 3 半胱氨酸蛋白酶基因的原核表达与蛋白纯化 | 第31-45页 |
| ·实验材料 | 第31-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第31页 |
| ·实验试剂 | 第31-32页 |
| ·实验仪器 | 第32-33页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因表达载体的构建 | 第33-37页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因表达片段的扩增与鉴定 | 第33-36页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因表达片段的扩增 | 第33-35页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因表达片段的鉴定 | 第35-36页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因原核表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因与原核表达载体pET30a(+)连接 | 第36页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因与pET30a(+)的重组质粒的鉴定 | 第36-37页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外表达与纯化 | 第37-38页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外表达 | 第37页 |
| ·利用IPTG诱导法对重组蛋白进行体外诱导表达 | 第37页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第37页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外纯化 | 第37-38页 |
| ·利用包涵体洗涤法对重组蛋白进行体外纯化 | 第37-38页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE检测 | 第38页 |
| ·半胱氩酸蛋白酶的复性及体外酸化 | 第38-40页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶浓度的测定 | 第38页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第38页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第38页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的复性 | 第38-39页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外酸化及检测 | 第39-40页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外酸化 | 第39页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶酸化条带的检测 | 第39-40页 |
| ·结果与分析 | 第40-43页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因原核表达载体的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外表达与纯化 | 第41-42页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶的体外激活 | 第42-43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 4 半胱氨酸蛋白酶基因PtCP5的功能研究 | 第45-59页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·植物材料、菌株与质粒 | 第45页 |
| ·实验试剂 | 第45-46页 |
| ·实验仪器 | 第46页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因转基因载体的构建 | 第46-48页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因与正义表达载体pBI121的连接 | 第46-48页 |
| ·重组质粒的转化与鉴定 | 第48页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因PtCP1、PtCP5转化拟南芥及转基因阳性苗筛选 | 第48-50页 |
| ·半胱氨酸蛋白酶基因转化野生型拟南芥 | 第48-49页 |
| ·转基因阳性苗的筛选 | 第49-50页 |
| ·转基因拟南芥种子的筛选 | 第49页 |
| ·转基因株系的鉴定 | 第49-50页 |
| ·纯合转基因株系的筛选 | 第50页 |
| ·PtCP5转基因株系的分析 | 第50-52页 |
| ·PtCP5基因表达量分析 | 第50-51页 |
| ·转基因株系的性状分析 | 第51-52页 |
| ·转基因株系的性状初探 | 第51页 |
| ·萌发率统计分析 | 第51页 |
| ·根长统计分析 | 第51-52页 |
| ·结果与分析 | 第52-56页 |
| ·转基因载体的构建 | 第52页 |
| ·转基因株系的筛选 | 第52-54页 |
| ·转基因株系的性状分析 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-59页 |
| 5 结论与讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 作者简介 | 第67-69页 |
| 导师简介 | 第69-71页 |
| 获得成果目录 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
