| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 图和附表索引 | 第10-11页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 材料与方法 | 第14-35页 |
| 1. 实验材料和仪器设备 | 第14-21页 |
| ·标本采集 | 第14页 |
| ·菌株与载体 | 第14页 |
| ·主要试剂 | 第14-15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| ·主要溶液配制 | 第16-18页 |
| ·引物和连接肽Linker的设计 | 第18-21页 |
| 2. 实验方法 | 第21-35页 |
| ·技术路线 | 第21页 |
| ·淋巴细胞总RNA的抽提 | 第21-23页 |
| ·标本采集 | 第21-22页 |
| ·总RNA提取的准备工作 | 第22页 |
| ·总RNA的提取步骤如下 | 第22页 |
| ·TRIZOL法提取总细胞RNA | 第22-23页 |
| ·逆转录(RT-PCR)扩增cDNA | 第23-26页 |
| ·逆转录前准备 | 第23页 |
| ·半巢式PCR扩增抗体轻重链基因 | 第23-26页 |
| ·基因扩增产物结果分析 | 第26页 |
| ·重链和轻链PCR产物DNA片段凝胶回收 | 第26-27页 |
| ·Linker连接肽的合成和酶促磷酸化粘端 | 第27-28页 |
| ·Linker A 和 Linker B形成双链DNA | 第27页 |
| ·双链Linker磷酸化 | 第27-28页 |
| ·V_H+Linker+V_L的制备 | 第28-29页 |
| ·轻链V_L与连接肽Linker连接 | 第28页 |
| ·重链V_H与V_L+Linker连接 | 第28页 |
| ·单链抗体(ScFv)的扩增 | 第28-29页 |
| ·制备载体质粒DNA | 第29-30页 |
| ·用质粒小提试剂盒提取质粒DNA | 第29页 |
| ·提取质粒DNA的操作步骤 | 第29-30页 |
| ·单链抗体基因库(ScFv)与噬菌粒载体pCANTAB-5E拼接 | 第30-32页 |
| ·V_L+Linker+V_H(ScFv)单链抗体PCR产物SfiⅠ酶切 | 第30-31页 |
| ·第二步Not Ⅰ酶切 | 第31页 |
| ·载体pCANTAB-5E质粒酶切 | 第31页 |
| ·单链抗体VL+Linker+VH(ScFv)和载体质粒pCANTAB-5E纯化 | 第31页 |
| ·单链抗体V_L+Linker+V_H(ScFv) 与载体pCANTAB-5E的拼接 | 第31-32页 |
| ·制备感受态大肠杆菌TG1 | 第32页 |
| ·辅助噬菌体的制备 | 第32-33页 |
| ·噬菌体的滴定 | 第33页 |
| ·转化感受态大肠杆菌TG1和构建ScFv单链噬菌体抗体库 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的特异PCR鉴定 | 第34页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定和保存 | 第34-35页 |
| 结果与分析 | 第35-39页 |
| 1. 尘肺病人外周血RNA的提取 | 第35页 |
| 2. RT-PCR扩增抗体轻链、重链基因片段 | 第35-36页 |
| 3. 单链抗体ScFv基因的组装与扩增 | 第36-37页 |
| 4. ScFv基因的酶切、连接、转化和挽救 | 第37页 |
| 5. 阳性重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 6. 抗体库库容量的鉴定 | 第38-39页 |
| 讨论 | 第39-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 综述 | 第47-58页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 个人简历 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
