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人3、7型腺病毒单克隆抗体制备及应用研究

摘要第1-9页
Abstract第9-11页
主要符号表第11-12页
前言第12-16页
 1 采用衣壳嵌合策略构建的重组腺病毒在单克隆抗体的制备中的应用第12页
 2 治疗性抗体在病毒感染性疾病中的应用第12-13页
 3 腺病毒感染和腺病毒中和表位鉴定第13-16页
材料和方法第16-30页
 1 材料第16-18页
   ·菌株和质粒第16页
   ·动物、细胞和病毒株第16-17页
   ·试剂和耗材第17-18页
   ·主要仪器第18页
 2 人 7 型腺病毒六邻体高变区 5(HAdv-7 HVR5)肽合成、偶联及GST-HVR5 融合蛋白表达第18-20页
   ·HAdv-7 HVR5 肽的化学合成及偶联第18页
   ·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞及转化第18-19页
   ·HVR5-GST 融合蛋白的表达与纯化第19-20页
 3 重组病毒大量培养与纯化第20-21页
 4 rAdMHE3 单克隆抗体制备第21-23页
   ·免疫小鼠第21-22页
   ·免疫后脾细胞和杂交瘤细胞融合第22页
   ·阳性杂交瘤的筛选、单克隆及诱导腹水第22-23页
   ·阳性杂交瘤的单克隆及诱导腹水第23页
 5 rAdMHE3 腹水效价的测定第23页
 6 抗体亚类分析第23-24页
 7 腹水纯化第24页
 8 单抗辣根过氧化物酶(HRP)标记第24-25页
 9 体外腺病毒中和实验第25页
 10 人腺病毒 7 型中和抗体的鉴定第25-27页
   ·抗体结合竞争 ELISA第25页
   ·重组腺病毒结合实验第25-26页
   ·小鼠免疫血清的制备第26页
   ·人 3 型和 7 型腺病毒六邻体重组蛋白(A3H 和 A7nH)、HVR5-GST融合蛋白(GST-A7R5)和 BSA 偶联 HVR5 合成肽(BSA-A7R5)结合实验第26页
   ·免疫印迹实验第26-27页
 11 针对 Ad3EGFP 的中和单抗鉴定第27-29页
   ·腺病毒结合实验第27页
   ·六邻体重组蛋白 A3H 和 A7nH 结合实验第27-28页
   ·免疫印迹分析第28页
   ·GST 融合肽结合实验第28-29页
 12 直接免疫荧光实验第29页
   ·异硫氰酸荧光素(FITC)标记单抗第29页
   ·直接免疫荧光实验第29页
 13 统计分析第29-30页
结果第30-44页
 1 针对 HAdv-7 的中和单抗鉴定第31-36页
   ·抗体结合竞争 ELISA第31-32页
   ·腺病毒结合实验第32-34页
   ·免疫印迹实验第34页
   ·血清体外腺病毒中和实验第34-36页
   ·重组蛋白和合成肽结合实验第36页
 2 针对 Ad3EGFP 的中和单抗鉴定第36-39页
   ·免疫印迹分析第36-37页
   ·腺病毒结合实验第37-38页
   ·重组蛋白结合实验第38-39页
 3 直接免疫荧光实验第39-44页
讨论第44-47页
结论第47-48页
参考文献第48-52页
综述第52-68页
 参考文献第61-68页
攻读学位期间取得的研究成果第68-69页
致谢第69-70页

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