摘要 | 第1-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
主要符号表 | 第11-12页 |
前言 | 第12-16页 |
1 采用衣壳嵌合策略构建的重组腺病毒在单克隆抗体的制备中的应用 | 第12页 |
2 治疗性抗体在病毒感染性疾病中的应用 | 第12-13页 |
3 腺病毒感染和腺病毒中和表位鉴定 | 第13-16页 |
材料和方法 | 第16-30页 |
1 材料 | 第16-18页 |
·菌株和质粒 | 第16页 |
·动物、细胞和病毒株 | 第16-17页 |
·试剂和耗材 | 第17-18页 |
·主要仪器 | 第18页 |
2 人 7 型腺病毒六邻体高变区 5(HAdv-7 HVR5)肽合成、偶联及GST-HVR5 融合蛋白表达 | 第18-20页 |
·HAdv-7 HVR5 肽的化学合成及偶联 | 第18页 |
·氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞及转化 | 第18-19页 |
·HVR5-GST 融合蛋白的表达与纯化 | 第19-20页 |
3 重组病毒大量培养与纯化 | 第20-21页 |
4 rAdMHE3 单克隆抗体制备 | 第21-23页 |
·免疫小鼠 | 第21-22页 |
·免疫后脾细胞和杂交瘤细胞融合 | 第22页 |
·阳性杂交瘤的筛选、单克隆及诱导腹水 | 第22-23页 |
·阳性杂交瘤的单克隆及诱导腹水 | 第23页 |
5 rAdMHE3 腹水效价的测定 | 第23页 |
6 抗体亚类分析 | 第23-24页 |
7 腹水纯化 | 第24页 |
8 单抗辣根过氧化物酶(HRP)标记 | 第24-25页 |
9 体外腺病毒中和实验 | 第25页 |
10 人腺病毒 7 型中和抗体的鉴定 | 第25-27页 |
·抗体结合竞争 ELISA | 第25页 |
·重组腺病毒结合实验 | 第25-26页 |
·小鼠免疫血清的制备 | 第26页 |
·人 3 型和 7 型腺病毒六邻体重组蛋白(A3H 和 A7nH)、HVR5-GST融合蛋白(GST-A7R5)和 BSA 偶联 HVR5 合成肽(BSA-A7R5)结合实验 | 第26页 |
·免疫印迹实验 | 第26-27页 |
11 针对 Ad3EGFP 的中和单抗鉴定 | 第27-29页 |
·腺病毒结合实验 | 第27页 |
·六邻体重组蛋白 A3H 和 A7nH 结合实验 | 第27-28页 |
·免疫印迹分析 | 第28页 |
·GST 融合肽结合实验 | 第28-29页 |
12 直接免疫荧光实验 | 第29页 |
·异硫氰酸荧光素(FITC)标记单抗 | 第29页 |
·直接免疫荧光实验 | 第29页 |
13 统计分析 | 第29-30页 |
结果 | 第30-44页 |
1 针对 HAdv-7 的中和单抗鉴定 | 第31-36页 |
·抗体结合竞争 ELISA | 第31-32页 |
·腺病毒结合实验 | 第32-34页 |
·免疫印迹实验 | 第34页 |
·血清体外腺病毒中和实验 | 第34-36页 |
·重组蛋白和合成肽结合实验 | 第36页 |
2 针对 Ad3EGFP 的中和单抗鉴定 | 第36-39页 |
·免疫印迹分析 | 第36-37页 |
·腺病毒结合实验 | 第37-38页 |
·重组蛋白结合实验 | 第38-39页 |
3 直接免疫荧光实验 | 第39-44页 |
讨论 | 第44-47页 |
结论 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-52页 |
综述 | 第52-68页 |
参考文献 | 第61-68页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第68-69页 |
致谢 | 第69-70页 |