| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-20页 |
| ·苜蓿皂苷降低机体胆固醇的作用及其机理研究进展 | 第10-14页 |
| ·苜蓿皂苷结构 | 第10页 |
| ·苜蓿皂苷的理化特征 | 第10-11页 |
| ·苜蓿皂苷的主要生物学活性 | 第11-14页 |
| ·苜蓿皂苷具有溶血作用 | 第11页 |
| ·苜蓿皂苷具有增加免疫、抗氧化作用 | 第11页 |
| ·苜蓿皂苷具有抗菌消炎作用 | 第11页 |
| ·苜蓿皂苷具有调节脂质代谢,降低胆固醇的作用 | 第11-12页 |
| ·苜蓿皂苷的其它作用 | 第12页 |
| ·苜蓿皂苷降低机体胆固醇的分子机理研究 | 第12-14页 |
| ·苜蓿皂苷影响胆固醇的吸收和合成,减少机体胆固醇的来源 | 第12-13页 |
| ·苜蓿皂苷加速胆汁酸的排泄,影响肝肠循环 | 第13-14页 |
| ·苜蓿皂苷促进LDL受体、非受体途径的代谢 | 第14页 |
| ·苜蓿皂苷影响胆固醇的转运 | 第14页 |
| ·低密度脂蛋白受体及其调节机制研究进展 | 第14-18页 |
| ·LDLR的结构和功能 | 第15页 |
| ·LDLR的调节机制 | 第15-16页 |
| ·LDLR的胆固醇依赖的调节机制 | 第15-16页 |
| ·LDLR的非胆固醇依赖的调节机制 | 第16页 |
| ·影响LDLR mRNA表达调控的因素 | 第16-18页 |
| ·HMG-CoA还原酶抑制剂 | 第16页 |
| ·激素 | 第16页 |
| ·胆固醇 | 第16-17页 |
| ·植物提取物 | 第17-18页 |
| ·其他因素 | 第18页 |
| ·展望 | 第18-20页 |
| 2 引言 | 第20-22页 |
| 3 试验一 苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞基因表达的影响 | 第22-40页 |
| ·材料与方法 | 第22-26页 |
| ·试验材料 | 第22页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第22-23页 |
| ·细胞培养前的准备工作 | 第23-24页 |
| ·细胞培养、传代、冻存和复苏 | 第24-25页 |
| ·细胞培养与传代 | 第24页 |
| ·细胞冻存 | 第24页 |
| ·细胞复苏 | 第24-25页 |
| ·细胞计数 | 第25页 |
| ·BRL大鼠肝细胞的培养 | 第25-26页 |
| ·指标测定与方法 | 第26-31页 |
| ·MTT法测定苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞活性的影响 | 第26-27页 |
| ·MTT溶液的配制 | 第26-27页 |
| ·细胞活性的测定方法 | 第27页 |
| ·mRNA相对表达量测定 | 第27-31页 |
| ·大鼠BRL肝细胞总RNA的提取 | 第27-28页 |
| ·RNA浓度的测定 | 第28页 |
| ·总RNA的质量检测 | 第28页 |
| ·RNA反转录过程 | 第28-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第29-31页 |
| ·荧光定量PCR | 第31页 |
| ·统计分析 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-35页 |
| ·MTT法检测苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞增殖活性的影响 | 第31-32页 |
| ·苜蓿皂苷对正常和脂变大鼠BRL肝细胞LDLR mRNA表达量的影响 | 第32-33页 |
| ·苜蓿皂苷对正常和脂变大鼠BRL肝细胞LXRα mRNA表达量的影响 | 第33-34页 |
| ·苜蓿皂苷对正常和脂变大鼠BRL肝细胞FXR mRNA表达量的影响 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·MTT法检测苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞活性的影响 | 第35-36页 |
| ·苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞LDLR mRNA表达量的影响 | 第36页 |
| ·苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞LXRα mRNA表达量的影响 | 第36-37页 |
| ·苜蓿皂苷对大鼠BRL肝细胞FXR mRNA表达量的影响 | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-40页 |
| 4 试验二 重组质粒pNTAP-LDLR的构建及表达 | 第40-54页 |
| ·材料与方法 | 第40-42页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第40-41页 |
| ·主要溶液的配制 | 第41-42页 |
| ·指标测定与方法 | 第42-48页 |
| ·LDLR基因的扩增和T-A克隆 | 第42-43页 |
| ·大鼠肝脏总RNA提取 | 第42-43页 |
| ·RNA浓度的测定：同试验一 | 第43页 |
| ·总RNA的质量检测：同试验一 | 第43页 |
| ·RNA反转录过程：同试验一 | 第43页 |
| ·引物设计与合成 | 第43页 |
| ·LDLR片段的扩增和纯化回收 | 第43页 |
| ·LDLR基因T-A克隆 | 第43页 |
| ·重组载体的构建和鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组载体的构建 | 第43-44页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第44页 |
| ·重组质粒转染HEK-293T检测目的蛋白表达 | 第44-48页 |
| ·293T细胞的培养 | 第45页 |
| ·Western blotting检测LDLR蛋白的表达 | 第45-48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·总RNA提取 | 第48页 |
| ·LDLR基因扩增 | 第48页 |
| ·PCR产物T-A克隆菌落PCR鉴定及测序鉴定 | 第48-49页 |
| ·pNTAP-LDLR串联亲和表达载体的构建和酶切鉴定 | 第49页 |
| ·pNTAP-LDLR串联亲和表达载体测序鉴定 | 第49-50页 |
| ·Western blot检测分析 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| ·小结 | 第52-54页 |
| 5 结论与展望 | 第54-55页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 英文摘要 | 第62-63页 |
