| 英文缩略表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-18页 |
| ABSTRACT | 第18-25页 |
| 前言 | 第25-31页 |
| 参考文献 | 第28-31页 |
| 第一部分 全骨髓贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞的鉴定及多向分化 | 第31-49页 |
| 前言 | 第31页 |
| 1.材料 | 第31-36页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·主要实验试剂 | 第31-32页 |
| ·主要试剂的配制 | 第32-33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·实验器材的清洗 | 第33-34页 |
| ·实验器材的包装 | 第34-35页 |
| ·消毒灭菌 | 第35-36页 |
| 2.方法 | 第36-39页 |
| ·BMSCs的分离、培养、纯化及传代 | 第36-37页 |
| ·MTT法绘制BMSCs生长曲线 | 第37页 |
| ·BMSCs表面抗原鉴定及成骨、成脂细胞诱导分化 | 第37-39页 |
| 3.结果 | 第39-41页 |
| ·BMSCs形态学观察 | 第39页 |
| ·绘制BMSCs生长曲线 | 第39页 |
| ·BMSCs表面抗原流式细胞仪鉴定结果 | 第39页 |
| ·BMSCs成骨诱导分化茜素红染色及成脂诱导分化后油红‘O’染色结果 | 第39-41页 |
| 4.讨论 | 第41-45页 |
| ·分离BMSCs的方法 | 第41页 |
| ·全骨髓贴壁法分离培养BMSCs的注意事项 | 第41-42页 |
| ·BMSCs的形态学观察 | 第42页 |
| ·BMSCs生长曲线绘制、表面抗原鉴定及成骨、成脂分化 | 第42-45页 |
| 参考文献 | 第45-47页 |
| 附图1 | 第47-49页 |
| 第二部分 外源性HGF在TRAIL促进肝星状细胞凋亡中的作用 | 第49-72页 |
| 前言 | 第49页 |
| 1.材料 | 第49-52页 |
| ·细胞 | 第49页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第49-50页 |
| ·主要试剂配置 | 第50-52页 |
| 2.方法 | 第52-58页 |
| ·原代HSCs的复苏、传代、冻存 | 第52-53页 |
| ·原代HSCs活化的鉴定 | 第53页 |
| ·细胞实验分组 | 第53-54页 |
| ·MTT法检测各浓度HGF及TRAIL对HSCs增殖的影响 | 第54页 |
| ·流式细胞仪检测各组HSCs的凋亡 | 第54-55页 |
| ·流式细胞仪免疫荧光法检测HSCs表面DR5的荧光强度 | 第55页 |
| ·Western blot法检测HSCs DR5蛋白的表达 | 第55-58页 |
| 3.结果 | 第58-62页 |
| ·HSCs的复苏、传代后形态学观察及α-SMA鉴定 | 第58页 |
| ·不同浓度HGF及TRAIL对HSCs增殖的影响 | 第58-59页 |
| ·各组中HSCs的凋亡率 | 第59-60页 |
| ·各组中DR5蛋白的表达 | 第60-61页 |
| ·流式细胞仪免疫荧光法检测HSCs表面DR5的荧光强度 | 第61-62页 |
| 4.讨论 | 第62-66页 |
| ·星状细胞的特点 | 第62页 |
| ·HGF及TRAIL对HSCs增殖的影响 | 第62-63页 |
| ·HSCs的凋亡 | 第63-64页 |
| ·外源性HGF在TRAIL促进HSCs凋亡中的作用 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-69页 |
| 附图2 | 第69-72页 |
| 第三部分 慢病毒介导HGF-ShRNA下调BMSCs及HSCs来源的HGF表达后对共培养体系中HSCs凋亡的影响 | 第72-110页 |
| 前言 | 第72-73页 |
| 1.材料 | 第73-74页 |
| ·实验动物及细胞 | 第73页 |
| ·主要实验试剂 | 第73-74页 |
| ·主要仪器 | 第74页 |
| 2.方法 | 第74-84页 |
| ·细胞共培养体系的建立 | 第74-75页 |
| ·实验分组 | 第75页 |
| ·ELISA法检测共培养组上清液HGF及TRAIL的浓度 | 第75-76页 |
| ·流式细胞仪Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡 | 第76页 |
| ·提取细胞总RNA、cDNA合成及荧光定量PCR | 第76-78页 |
| ·HGF-ShRNA慢病毒包装及慢病毒转染流程 | 第78-81页 |
| ·HGF-ShRNA慢病毒液转染BMSCs、HSCs及转染效率评估 | 第81-83页 |
| ·数据分析 | 第83-84页 |
| 3.结果 | 第84-92页 |
| ·HGF-Rat-1624质粒测序结果 | 第84页 |
| ·细胞转染后观察绿色荧光蛋白表达及HGF蛋白的表达 | 第84-85页 |
| ·Elisa法检测转染后各组上清液中HGF的浓度 | 第85-86页 |
| ·Elisa法检测共培养组上清液中HGF及TRAIL的浓度 | 第86-88页 |
| ·流式细胞仪Annexin-V-FITC/PI双染法检测HSCs凋亡率 | 第88-89页 |
| ·免疫印迹法检测HSCs中DR5、Caspase-8蛋白/Actin比值 | 第89-90页 |
| ·FQ-PCR溶解曲线及扩增曲线分析 | 第90页 |
| ·FQ-PCR检测HSCs中DR5、Caspase-8mRNA的表达 | 第90-92页 |
| 4.讨论 | 第92-100页 |
| ·BMSCs移植治疗的现状及可能机制 | 第92-93页 |
| ·HSCs在肝纤维化中的作用及其与HSC-T6的区别 | 第93页 |
| ·共培养体系的建立 | 第93-94页 |
| ·TNF-α预处理后在促进HSCs凋亡中的作用 | 第94-95页 |
| ·慢病毒四质粒体系的安全性 | 第95-96页 |
| ·慢病毒载体的优势 | 第96-97页 |
| ·HGF-ShRNA慢病毒液转染细胞及转染效率的验证 | 第97页 |
| ·慢病毒介导的HGF-ShRNA部分下调BMSCs及HSCs的HGF表达后各指标的变化 | 第97-98页 |
| ·问题及展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-106页 |
| 附图3 | 第106-110页 |
| 结论 | 第110-111页 |
| 综述1 肝细胞生长因子及其对星状细胞凋亡作用机制研究进展 | 第111-124页 |
| 1.HGF的产生及结构 | 第111-112页 |
| 2.HGF的生物学功能 | 第112-114页 |
| ·促血管形成 | 第112-113页 |
| ·促有丝分裂及启动肝再生 | 第113页 |
| ·促进损伤组织的修复作用 | 第113-114页 |
| 3.HSCs的特点及活化 | 第114-117页 |
| ·HSCs的特点 | 第114-115页 |
| ·HSCs的激活 | 第115-117页 |
| ·激活后HSCs的结局 | 第117页 |
| 4.HGF促进其凋亡的作用 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-124页 |
| 综述2 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体调控细胞凋亡的研究进展 | 第124-134页 |
| 1.TRAIL及死亡受体的结构及分布 | 第124-126页 |
| ·TRAIL的结构及分布 | 第124-125页 |
| ·死亡受体的结构和分布 | 第125-126页 |
| 2.死亡受体诱导凋亡的途径 | 第126-127页 |
| 3.调节死亡受体诱导凋亡的因素 | 第127-128页 |
| ·诱骗受体 | 第127页 |
| ·c-FLIP的调节作用 | 第127页 |
| ·核因子-κB | 第127-128页 |
| ·某些增强剂及抑制剂对死亡受体表达的影响 | 第128页 |
| 4.星状细胞的凋亡及死亡受体的表达 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 读博期间发表的论文 | 第135-136页 |
| 读博期间主持或作为主要成员参与的课题 | 第136页 |
