| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-41页 |
| ·鳗弧菌概述 | 第15-27页 |
| ·生物学特性 | 第15-17页 |
| ·鳗弧菌病 | 第17-19页 |
| ·致病因子 | 第19-27页 |
| ·运动力和趋化性 | 第19-21页 |
| ·铁摄取系统 | 第21-23页 |
| ·胞外产物 | 第23-25页 |
| ·密度感应系统 | 第25-27页 |
| ·Ⅵ型分泌系统概述 | 第27-41页 |
| ·细菌分泌系统简介 | 第27-29页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的发现 | 第29-30页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的组成 | 第30-34页 |
| ·T6SS 蛋白组分简介 | 第31-32页 |
| ·T6SS 的结构蛋白 | 第32-33页 |
| ·T6SS 的转运蛋白 | 第33-34页 |
| ·T6SS 的分泌蛋白 | 第34页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的作用机制 | 第34-37页 |
| ·T6SS 转运结构装配模型 | 第34-35页 |
| ·T6SS 的作用机制 | 第35-37页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的调控 | 第37-39页 |
| ·Ⅵ型分泌系统的功能研究进展 | 第39-41页 |
| ·T6SS 可以增强细菌对外界环境的适应性 | 第39页 |
| ·T6SS 可以提高细菌对宿主细胞的致病力 | 第39-40页 |
| ·T6SS 的其他功能 | 第40-41页 |
| 第二章 鳗弧菌Ⅵ型分泌系统（T6SS）的功能研究 | 第41-91页 |
| ·鳗弧菌Ⅵ型分泌系统（T6SS）的操纵子结构分析 | 第42-55页 |
| ·材料和方法 | 第42-50页 |
| ·实验菌株和质粒 | 第42页 |
| ·培养条件 | 第42页 |
| ·染色体步移法克隆鳗弧菌 T6SS 启动子区 | 第42-45页 |
| ·生物信息学预测分析可能的 T6SS 启动子区 | 第45页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 基因簇操纵子结构分析 | 第45-50页 |
| ·结果 | 第50-54页 |
| ·T6SS 上游启动子区扩增序列 | 第50-51页 |
| ·T6SS 启动子区的生物信息学预测 | 第51-52页 |
| ·T6SS 基因簇操纵子结构分析 | 第52-54页 |
| ·小结和讨论 | 第54-55页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 的基因缺失突变株构建和表型特征检测 | 第55-66页 |
| ·材料和方法 | 第55-58页 |
| ·实验菌株和培养基 | 第55页 |
| ·基因缺失突变株的构建 | 第55-56页 |
| ·突变株在 TSB 培养条件下的生长曲线测定 | 第56页 |
| ·突变株在缺铁基本培养基 M9 培养条件下的生长曲线测定 | 第56-57页 |
| ·突变株的泳动能力检测 | 第57页 |
| ·突变株的菌膜形成能力检测 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-64页 |
| ·T6SS 基因缺失突变株在 TSB 培养条件下的生长 | 第58-60页 |
| ·突变株在缺铁基本培养基 M9 培养条件下的生长 | 第60-62页 |
| ·T6SS 基因缺失突变对泳动能力的影响 | 第62-63页 |
| ·T6SS 基因缺失突变对菌膜生成能力的影响 | 第63-64页 |
| ·小结与讨论 | 第64-66页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 的膜蛋白相互作用研究 | 第66-84页 |
| ·材料和方法 | 第66-76页 |
| ·实验菌株和材料 | 第66-67页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 跨膜蛋白的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 跨膜蛋白的重组表达与纯化 | 第68-71页 |
| ·重组表达蛋白的大鼠抗血清制备与效价测定 | 第71-73页 |
| ·大鼠抗血清的制备 | 第72-73页 |
| ·间接 Elisa 测定抗血清效价 | 第73页 |
| ·免疫共沉淀法研究鳗弧菌 T6SS 膜蛋白的相互作用 | 第73-76页 |
| ·共表达载体的构建 | 第73-74页 |
| ·目的蛋白的共表达 | 第74页 |
| ·目的蛋白的体外结合实验 | 第74页 |
| ·Western blot 分析蛋白的分泌和表达 | 第74-76页 |
| ·结果 | 第76-82页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 跨膜蛋白的生物信息学分析 | 第76-78页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 膜蛋白基因的克隆 | 第78页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 蛋白 VAA113，VAA115，VAA120 的表达和共表达 | 第78-79页 |
| ·蛋白 VAA113，VAA115，VAA120 的纯化和抗血清制备 | 第79-80页 |
| ·蛋白 VAA113，VAA115，VAA120 的体外相互作用分析 | 第80-82页 |
| ·小结与讨论 | 第82-84页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 分泌基质蛋白的检测 | 第84-91页 |
| ·材料和方法 | 第84-86页 |
| ·实验菌株和材料 | 第84页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 分泌蛋白 VAA017 的重组表达与纯化 | 第84-85页 |
| ·VAA017 重组蛋白的大鼠抗血清制备与效价测定 | 第85页 |
| ·鳗弧菌 VAA017 蛋白在不同培养条件下的 Western blot 检测 | 第85页 |
| ·鳗弧菌 VAA017 蛋白分泌的生物信息学分析 | 第85-86页 |
| ·结果 | 第86-90页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 分泌蛋白 VAA017 的重组表达 | 第86页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 分泌蛋白 VAA017 的纯化和抗血清制备 | 第86-87页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 分泌蛋白 VAA017 在不同培养条件下的检测 | 第87-89页 |
| ·鳗弧菌 VAA017 蛋白分泌的生物信息学分析 | 第89-90页 |
| ·小结与讨论 | 第90-91页 |
| 第三章 鳗弧菌σ因子RpoN（σ~(54)）和RpoS（σ~(38)）的功能鉴定 | 第91-122页 |
| ·鳗弧菌σ因子 RpoN（σ~(54)）和 RpoS（σ~(38)）的基因缺失突变株和互补株的构建 | 第91-98页 |
| ·材料和方法 | 第91-95页 |
| ·实验菌株、质粒及引物 | 第91-93页 |
| ·rpoN基因缺失突变株的构建 | 第93-95页 |
| ·rpoN基因缺失突变株的互补株构建 | 第95页 |
| ·rpoS 基因缺失突变株和互补株的构建 | 第95页 |
| ·结果 | 第95-97页 |
| ·rpoN缺失突变株的鉴定 | 第95-96页 |
| ·互补株ΔrpoN-C的鉴定 | 第96-97页 |
| ·小结与讨论 | 第97-98页 |
| ·鳗弧菌σ因子缺失突变株ΔrpoN和ΔrpoS的表型检测 | 第98-117页 |
| ·材料和方法 | 第98-101页 |
| ·实验菌株 | 第98页 |
| ·突变株在 TSB 培养条件下的生长曲线测定 | 第98页 |
| ·突变株在 TSB 培养基加铁螯合剂 DIP 下的生长曲线测定 | 第98页 |
| ·突变株在基本培养基 M9 加铁螯合剂 DIP 下的生长曲线测定 | 第98页 |
| ·突变株的泳动能力检测 | 第98页 |
| ·突变株在扫描电镜（SEM）下鞭毛生成的检测 | 第98页 |
| ·突变株的菌膜形成能力检测 | 第98页 |
| ·突变株的胞外多糖形成能力检测 | 第98-99页 |
| ·突变株的明胶酶活性检测 | 第99页 |
| ·突变株的胞外金属蛋白酶 EmpA 分泌检测 | 第99-100页 |
| ·突变株的抗生素敏感实验 | 第100页 |
| ·rpoN识别结合位点的生物信息学分析 | 第100-101页 |
| ·结果 | 第101-113页 |
| ·突变株在 TSB 正常培养条件下的生长 | 第101页 |
| ·突变株在 TSB 加铁鳌合剂 DIP 培养条件下的生长 | 第101-102页 |
| ·突变株在基本培养基 M9 加铁鳌合剂 DIP 条件下的生长 | 第102-104页 |
| ·突变株的泳动能力检测 | 第104页 |
| ·突变株在扫描电镜（SEM）下鞭毛生成的检测 | 第104-105页 |
| ·突变株的菌膜形成能力检测 | 第105-106页 |
| ·突变株的胞外多糖形成能力检测 | 第106-107页 |
| ·突变株的明胶酶活性检测 | 第107-108页 |
| ·突变株的胞外金属蛋白酶 EmpA 分泌检测 | 第108-109页 |
| ·突变株的抗生素敏感实验 | 第109-110页 |
| ·鳗弧菌全基因组范围内分析查找rpoN识别结合位点 | 第110-113页 |
| ·小结与讨论 | 第113-117页 |
| ·鳗弧菌σ因子缺失突变株ΔrpoN和ΔrpoS的毒力检测 | 第117-122页 |
| ·材料和方法 | 第117-118页 |
| ·实验菌株 | 第117页 |
| ·突变株的毒力检测 | 第117-118页 |
| ·结果 | 第118-120页 |
| ·ΔrpoN和ΔrpoS的浸泡攻毒实验 | 第118页 |
| ·ΔrpoN和ΔrpoS的腹腔注射攻毒实验 | 第118-119页 |
| ·ΔrpoN和ΔrpoS的体内存活实验 | 第119-120页 |
| ·小结与讨论 | 第120-122页 |
| 第四章 鳗弧菌T6SS和RpoN及RpoS的转录调控网络构建 | 第122-135页 |
| ·鳗弧菌 T6SS 基因突变株的转录水平调控检测 | 第122-127页 |
| ·材料和方法 | 第122-124页 |
| ·实验菌株及试剂引物 | 第122-123页 |
| ·突变株不同时期 cDNA 模板的制备 | 第123页 |
| ·突变株转录水平的 qRT-PCR 检测 | 第123-124页 |
| ·结果 | 第124-126页 |
| ·突变株Δ110 的转录水平检测 | 第124-125页 |
| ·突变株Δ117 的转录水平检测 | 第125页 |
| ·突变株Δ120 的转录水平检测 | 第125-126页 |
| ·小结与讨论 | 第126-127页 |
| ·鳗弧菌Σ因子RpoN和RpoS的转录水平调控检测 | 第127-132页 |
| ·材料和方法 | 第127页 |
| ·实验菌株及引物 | 第127页 |
| ·突变株ΔrpoN和ΔrpoS不同时期cDNA模板的制备 | 第127页 |
| ·突变株ΔrpoN和ΔrpoS转录水平的qRT-PCR检测 | 第127页 |
| ·结果 | 第127-129页 |
| ·突变株ΔrpoN的转录水平检测 | 第127-129页 |
| ·突变株ΔrpoS 的转录水平检测 | 第129页 |
| ·小结与讨论 | 第129-132页 |
| ·鳗弧菌T6SS与RpoN以及RpoS的调控网络构建 | 第132-135页 |
| ·T6SS与RpoN的调控关系分析 | 第132-133页 |
| ·RpoN对T6SS的调控 | 第132页 |
| ·T6SS对RpoN的调控 | 第132-133页 |
| ·T6SS 与 RpoS 的调控关系分析 | 第133页 |
| ·RpoS 对 T6SS 的调控 | 第133页 |
| ·T6SS对RpoN的调控 | 第133页 |
| ·RpoN与RpoS的调控关系分析 | 第133页 |
| ·RpoN与RpoS对QS的调控关系分析 | 第133页 |
| ·T6SS与RpoN以及RpoS的调控网络构建 | 第133-135页 |
| 第五章 结论 | 第135-137页 |
| 参考文献 | 第137-160页 |
| 附录 | 第160-165页 |
| 作者简历 | 第165-166页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第166页 |
