| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 中英文对照表 | 第7-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1 国内外研究进展 | 第12-21页 |
| ·SCF复合体对植物生长发育的调控 | 第13-17页 |
| ·SCF介导植物激素的调控 | 第13-15页 |
| ·SCF介导胚胎发育的调控 | 第15页 |
| ·SCF介导花发育的调控 | 第15页 |
| ·SCF介导生物钟的调控 | 第15-16页 |
| ·SCF介导自交不亲和性的调控 | 第16页 |
| ·SCF介导植物衰老的调控 | 第16-17页 |
| ·SCF介导植物抗病性的调控 | 第17页 |
| ·非SCF复合体中SKP1的功能 | 第17-18页 |
| ·SKP1参与糖基化的调节 | 第18-21页 |
| ·参与植物激素平衡 | 第19页 |
| ·参与植物防御反应 | 第19-20页 |
| ·参与植物次生代谢 | 第20页 |
| ·参与植物信号转导 | 第20-21页 |
| ·SKP1的其他功能 | 第21页 |
| 2 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 实验材料及方法 | 第22-36页 |
| 1 实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·酶及其它生化试剂 | 第22页 |
| ·常用实验仪器 | 第22页 |
| ·培养基及缓冲液配方 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-36页 |
| ·论文中用到的引物 | 第23-24页 |
| ·OmSKP1基因及其蛋白的生物信息学分析 | 第24页 |
| ·水稻叶片蛋白的提取 | 第24-25页 |
| ·丙酮法提取组织总蛋白 | 第24页 |
| ·PBS法提取水稻叶片总蛋白 | 第24-25页 |
| ·Western Blot检测 | 第25页 |
| ·质粒的提取 | 第25-26页 |
| ·DNA目的片段的胶回收 | 第26页 |
| ·DNA目的片段的纯化 | 第26页 |
| ·感受态细菌的电击转化 | 第26-27页 |
| ·水稻RNA提取及cDNA合成 | 第27页 |
| ·水稻组织总RNA的提取 | 第27页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第27页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·目的基因OmSKP1和OsCOI1的扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR产物及载体的酶切 | 第28页 |
| ·酶切产物和载体的连接 | 第28页 |
| ·转化子的菌落PCR鉴定 | 第28-29页 |
| ·阳性克隆的酶切及测序鉴定 | 第29页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及SDS-page电泳 | 第29-30页 |
| ·蛋白的诱导表达及样品制备 | 第29页 |
| ·蛋白的SDS-page电泳 | 第29-30页 |
| ·E.coli菌体的细胞破碎 | 第30页 |
| ·OmSKP1基因的定点突变 | 第30-31页 |
| ·点突变质粒的PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物的消化及转化 | 第31页 |
| ·糖蛋白高碘酸-Schiff试剂染色法(PAS法) | 第31页 |
| ·GST重组蛋白的纯化及酶切 | 第31-32页 |
| ·GST-OmSKP1重组蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| ·GST重组蛋白的酶切 | 第32页 |
| ·myc-OmSKP1及flag-OsCOI1超表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·目的基因的扩增 | 第32页 |
| ·载体pCXUN-myc与pCXUN-flag的酶切 | 第32-33页 |
| ·OmSKP1与pCXUN-myc以及OsCOI1与pCXUN-flag的的连接 | 第33页 |
| ·双酶切检测 | 第33页 |
| ·转化农杆菌EHA105 | 第33页 |
| ·Northern blot | 第33页 |
| ·OmSKP1和OsCOI1蛋白的亚细胞定位 | 第33-36页 |
| ·目的基因的扩增 | 第33-34页 |
| ·载体pCXDG和pCXDR的酶切 | 第34页 |
| ·OmSKP1和OsCOl1基因PCR产物的酶切 | 第34页 |
| ·OmSKP1与pCXDG以及OsCOI1与pCXDR的的连接 | 第34页 |
| ·双酶切检测 | 第34-35页 |
| ·转化农杆菌EHA105 | 第35页 |
| ·转化洋葱表皮细胞 | 第35-36页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第36-49页 |
| 1 OmSKP1蛋白的生物信息学分析 | 第36-38页 |
| 2 OmSKP1及其同源蛋白的翻译后修饰 | 第38页 |
| 3 OmSKP1和OSCOI1的原核表达 | 第38-46页 |
| ·OmSKP1和OsCOI1原核表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·Trizol法提取水稻叶片总RNA | 第38-39页 |
| ·目的基因OmSKP1和OsCOI1的PCR扩增 | 第39页 |
| ·转化子的菌液PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·连接产物的酶切鉴定 | 第40-41页 |
| ·测序成功得到阳性克隆 | 第41页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及SDS-page电泳 | 第41-42页 |
| ·OmSKP1基因的定点突变 | 第42页 |
| ·重组蛋白的Western blot检测 | 第42-43页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| ·E.coli总蛋白的高碘酸-Schiff试剂染色(PAS法) | 第44-45页 |
| ·Thrombin酶切GST标签及Western blot | 第45-46页 |
| 4 水稻OmSKP1超表达和RNAI干扰载体的构建 | 第46-47页 |
| 5 Northern blot检测OmSKP1的表达 | 第47页 |
| 6 水稻OmSKP1和OsCOI1蛋白的亚细胞定位 | 第47-49页 |
| ·OmSKP1和OsCOI1亚细胞定位载体的构建 | 第47-48页 |
| ·OmSKP1和OsCOI1蛋白的亚细胞定位 | 第48-49页 |
| 第四章 结论和讨论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
