| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-22页 |
| ·前言 | 第12页 |
| ·RpoN的发现及其功能 | 第12-13页 |
| ·RpoS的发现及其功能 | 第13-14页 |
| ·RpoN和RpoS对鞭毛合成的调控机制 | 第14-18页 |
| ·鞭毛 | 第14-15页 |
| ·鞭毛的级联调控 | 第15-16页 |
| ·RpoN参与了鞭毛合成的调控 | 第16-17页 |
| ·RpoS参与了鞭毛合成的调控 | 第17-18页 |
| ·细菌的趋化及其调控 | 第18-20页 |
| ·立题依据及技术路线 | 第20-22页 |
| ·立题依据 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料和方法 | 第22-39页 |
| ·实验材料 | 第22-25页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·酶和化学试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器 | 第23-24页 |
| ·主要溶液配制 | 第24-25页 |
| ·实验方法 | 第25-39页 |
| ·碱裂解法小量提取细菌质粒 | 第25页 |
| ·基因的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第26-27页 |
| ·酶切及连接反应 | 第27-28页 |
| ·三亲本结合实验 | 第28页 |
| ·生长曲线的测定 | 第28页 |
| ·固氮酶活性的测定 | 第28-29页 |
| ·逆境胁迫实验 | 第29-30页 |
| ·细菌趋化运动实验 | 第30页 |
| ·生物膜测定 | 第30页 |
| ·鞭毛透射电镜实验 | 第30-31页 |
| ·荧光定量PCR实验 | 第31-33页 |
| ·RpoN蛋白表达载体的构建 | 第33-34页 |
| ·RpoS蛋白的表达 | 第34-35页 |
| ·利用2ml几丁质亲合柱进行蛋白纯化 | 第35-36页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第36-37页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第37-39页 |
| 3 结果分析 | 第39-61页 |
| ·P. stutzeri A1501中rpoN与rpoS基因缺失突变株和功能互补株的构建 | 第39-43页 |
| ·rpoN缺失突变株的构建原理 | 第39页 |
| ·rpoN基因重组载体的构建 | 第39-41页 |
| ·缺失突变株的筛选与验证 | 第41页 |
| ·rpoS缺失突变株的构建 | 第41页 |
| ·功能互补菌株的构建 | 第41-43页 |
| ·rpoN与rpoS突变株的表型鉴定 | 第43-51页 |
| ·P.stutzeri A1501中中rpoN和rpoS与其他菌中的同源分析 | 第43-45页 |
| ·野生型、突变株及功能互补菌株生长曲线的测定 | 第45-46页 |
| ·野生型、突变株及功能互补菌株固氮酶活的测定 | 第46-47页 |
| ·逆境胁迫条件下野生型与rpoS突变株的生长状况 | 第47-48页 |
| ·rpoN与rpoS基因突变对趋化能力的影响 | 第48页 |
| ·透射电镜实验 | 第48-49页 |
| ·生物膜测定 | 第49-50页 |
| ·荧光定量PCR分析鞭毛调控基因的表达情况 | 第50-51页 |
| ·固氮条件下突变株中固氮基因的表达情况分析 | 第51页 |
| ·RpoN与RpoS蛋白的表达纯化及其作用机制分析 | 第51-61页 |
| ·RpoN蛋白表达载体的构建 | 第51-53页 |
| ·RpoN蛋白的表达 | 第53-54页 |
| ·RpoS蛋白的表达 | 第54页 |
| ·内含肽介导的蛋白纯化 | 第54-55页 |
| ·RpoN及RpoS蛋白的高级结构及其所识别保守启动子预测 | 第55-58页 |
| ·凝胶阻滞实验分析基因与蛋白的结合 | 第58页 |
| ·水稻根表竞争定殖实验结果分析 | 第58-61页 |
| 4 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
