| 符号说明 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 引言 | 第17-32页 |
| ·低温胁迫对植物的伤害 | 第18-19页 |
| ·植物对低温的响应 | 第19-21页 |
| ·冷驯化增强植物抗冻性的原因 | 第19页 |
| ·活性氧的产生和清除 | 第19-21页 |
| ·植物体内渗透调节物质的积累 | 第21页 |
| ·低温胁迫响应中的信号转导 | 第21-22页 |
| ·低温胁迫响应中的转录调控 | 第22-27页 |
| ·CBF 转录因子 | 第23-24页 |
| ·CBF 上游调控因子 | 第24-25页 |
| ·CBF 下游调控因子 | 第25-27页 |
| ·bHLH 转录因子的特点 | 第27页 |
| ·ICE1 转录因子 | 第27-29页 |
| ·ICE1 转录因子的发现及基本特征 | 第27-28页 |
| ·ICE1 的转录后调控 | 第28-29页 |
| ·其他物种的 ICE1 转录因子 | 第29页 |
| ·番茄中的 CBF 和 ICE1 转录因子 | 第29-30页 |
| ·番茄中的 CBF 转录因子 | 第29-30页 |
| ·番茄中的 ICE1 转录因子 | 第30页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第30-32页 |
| 2 材料与方法 | 第32-55页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·酶及生化试剂 | 第32页 |
| ·PCR 引物 | 第32-33页 |
| ·实验方法 | 第33-55页 |
| ·番茄的栽培与胁迫处理 | 第33页 |
| ·植物总 RNA 的提取 | 第33-34页 |
| ·利用试剂盒提取 RNA | 第33-34页 |
| ·电泳检测 RNA 质量 | 第34页 |
| ·番茄 ICE1a 基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第34-35页 |
| ·利用兼并引物扩增中间片段 | 第35-36页 |
| ·番茄 ICE1a 基因全长序列的获得 | 第36页 |
| ·目的片段的回收（试剂盒） | 第36-37页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第38页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取（试剂盒） | 第38-39页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第39页 |
| ·DNA 序列测定 | 第39页 |
| ·亚细胞定位（基因枪） | 第39-41页 |
| ·洋葱表皮瞬时表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·基因枪微弹的准备 | 第40页 |
| ·基因枪转化 | 第40-41页 |
| ·转录激活活性检测 | 第41-43页 |
| ·BD 载体的构建 | 第41-42页 |
| ·乙酸锂法制备酵母感受态细胞 | 第42页 |
| ·酵母感受态细胞的转化 | 第42页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第42-43页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第43-45页 |
| ·RNA 的甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 | 第43页 |
| ·转膜 | 第43-44页 |
| ·预杂交 | 第44页 |
| ·探针的制备 | 第44-45页 |
| ·杂交 | 第45页 |
| ·荧光定量 PCR 分析 | 第45-46页 |
| ·用作 real-time PCR 模板的 cDNA 的合成 | 第45页 |
| ·qRT-PCR 引物设计 | 第45-46页 |
| ·qRT-PCR 的反应条件及结果计算 | 第46页 |
| ·植物表达载体的构建及转化 | 第46-48页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第46-47页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第47页 |
| ·农杆菌感受态细胞的转化与克隆筛选 | 第47页 |
| ·农杆菌介导转化烟草 | 第47-48页 |
| ·转基因烟草植株的鉴定 | 第48-49页 |
| ·小量法提取基因组 DNA | 第48页 |
| ·转基因植株的 PCR 检测 | 第48-49页 |
| ·转基因烟草纯合株系的选育 | 第49页 |
| ·转基因植株的抗逆性分析 | 第49-51页 |
| ·烟草种子的萌发实验 | 第50页 |
| ·烟草幼苗的胁迫处理 | 第50-51页 |
| ·烟草壮苗的胁迫处理 | 第51页 |
| ·生理指标的测定 | 第51-52页 |
| ·叶片电解质外渗量和膜脂过氧化程度分析 | 第51页 |
| ·脯氨酸和可溶性糖含量的测定 | 第51-52页 |
| ·超氧阴离子自由基（O2 ）和蛋白质含量的测定 | 第52页 |
| ·水分与叶绿素含量的测定 | 第52页 |
| ·转录因子与特异启动子元件的结合实验 | 第52-55页 |
| ·构建 pAbAi 载体 | 第53页 |
| ·转化酵母并获得报告菌株 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白与靶序列的结合实验 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-74页 |
| ·SlICE1a 基因的分离及其特征 | 第55-57页 |
| ·SlICE1a 基因全长的克隆 | 第55页 |
| ·SlICE1a 基因的序列特征分析 | 第55-57页 |
| ·SlICE1a 蛋白的亚细胞定位 | 第57-58页 |
| ·转录激活活性分析 | 第58-59页 |
| ·SlICE1a 蛋白与 GAL4-BD 的融合 | 第58-59页 |
| ·转录激活能力分析 | 第59页 |
| ·SlICE1a 基因在非生物胁迫下的表达分析 | 第59-61页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第59-60页 |
| ·荧光定量 PCR 表达分析 | 第60-61页 |
| ·SlICE1a 基因在烟草植株中的遗传转化 | 第61-64页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第61页 |
| ·过表达 SlICE1a 转基因烟草的获得与筛选 | 第61-64页 |
| ·转 SlICE1a 基因烟草的功能分析 | 第64-72页 |
| ·过表达 SlICE1a 提高了烟草的耐低温胁迫能力 | 第64-66页 |
| ·转基因烟草的耐冷性提高 | 第64-65页 |
| ·转基因烟草耐冷性提高的机理分析 | 第65-66页 |
| ·过表达 SlICE1a 提高了烟草的耐渗透胁迫和盐胁迫能力 | 第66-71页 |
| ·转基因烟草对渗透胁迫敏感性降低 | 第66-68页 |
| ·转基因烟草对盐胁迫敏感性降低 | 第68-70页 |
| ·转基因烟草耐渗透和盐胁迫能力提高的机理分析 | 第70-71页 |
| ·过表达 SlICE1a 提高了烟草的抗氧化胁迫能力 | 第71-72页 |
| ·过表达 SlICE1a 提高了转基因烟草中下游抗逆基因的表达 | 第72-74页 |
| 4 讨论 | 第74-82页 |
| ·SlICE1a 是 ICE1 家族的成员 | 第74页 |
| ·SlICE1a 可以识别结合并激活特异的 MYC 元件 | 第74-77页 |
| ·SlICE1a 参与多种环境胁迫信号和激素信号转导 | 第77-78页 |
| ·过表达 SlICE1a 提高了烟草对非生物胁迫的耐受性 | 第78-79页 |
| ·过表达 SlICE1a 没有抑制烟草的生长发育 | 第79页 |
| ·SlICE1a 与 SlICE1 的联系与区别 | 第79-80页 |
| ·展望 | 第80-82页 |
| 5 结论 | 第82-83页 |
| 6 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第92页 |
