| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-21页 |
| 1 绪论 | 第21-26页 |
| 2 miR-143对结直肠癌细胞生物学行为的影响 | 第26-47页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·细胞株 | 第26页 |
| ·质粒 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27-28页 |
| ·主要溶液的配制 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-37页 |
| ·细胞培养 | 第28-29页 |
| ·miR-143真核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·pGenesil-1载体的双酶切(BamHⅠ/HindⅢ) | 第30页 |
| ·DNA片段回收 | 第30-31页 |
| ·插入片段与酶切后pGenesil-1质粒的连接 | 第31页 |
| ·感受态细菌的制备 | 第31页 |
| ·感受态E.coil DH5α的转化及筛选 | 第31-32页 |
| ·质粒DNA的提取、质量鉴定及酶切测序鉴定 | 第32-33页 |
| ·重组pGenesil-1-miR-143质粒的转染和筛选稳定表达细胞株 | 第33页 |
| ·总RNA提取 | 第33-34页 |
| ·逆转录反应合成cDNA | 第34-35页 |
| ·Realtime PCR扩增 | 第35-36页 |
| ·Transwell | 第36页 |
| ·流式细胞术 | 第36-37页 |
| ·MTT检测 | 第37页 |
| ·统计学方法 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-45页 |
| ·pGenesil-1-miR-143重组质粒的双酶切电泳结果和测序结果 | 第37-40页 |
| ·构建稳定的高表达miR-143转染细胞系 | 第40-41页 |
| ·高表达miR-143对SW-480细胞生物学影响 | 第41-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·本章分结论 | 第46-47页 |
| 3 miR-143对结直肠癌细胞中Survivin、C-myc表达的影响 | 第47-59页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·主要试剂 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·细胞培养 | 第48-49页 |
| ·细胞转染 | 第49页 |
| ·RNA提取 | 第49页 |
| ·Realtime PCR检测RNA表达 | 第49页 |
| ·Western-blot检测 | 第49-50页 |
| ·统计学方法 | 第50页 |
| ·实验结果 | 第50-55页 |
| ·不同剂量miR-143的细胞转染 | 第51-52页 |
| ·不同剂量miR-143的细胞转染对c-myc基因的表达分析 | 第52-53页 |
| ·不同剂量miR-143的细胞转染对Survivin基因的表达分析 | 第53-54页 |
| ·miR-143转染对Akt信号通路的影响 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| ·本章分结论 | 第58-59页 |
| 4 miR-143联合奥沙利铂作用对结直肠癌细胞的作用影响 | 第59-73页 |
| ·实验材料 | 第59-61页 |
| ·材料 | 第59页 |
| ·主要试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器设备 | 第60-61页 |
| ·实验方法 | 第61-63页 |
| ·细胞培养 | 第61页 |
| ·TUNEL检测细胞凋亡 | 第61-62页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第62页 |
| ·MTT技术检测细胞生长 | 第62页 |
| ·Realtime PCR检测RNA表达 | 第62页 |
| ·Western blot检测蛋白水平表达 | 第62页 |
| ·统计学分析 | 第62-63页 |
| ·实验结果 | 第63-69页 |
| ·miR-143联合奥沙利铂作用对SW-480细胞的影响 | 第63-66页 |
| ·miR-143联合奥沙利铂作用对DNMT3A、DNMT3B、DNMT1的表达影响 | 第66-67页 |
| ·miR-143联合奥沙利铂作用对Bcl-2和caspase-3的表达影响 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-72页 |
| ·本章分结论 | 第72-73页 |
| 5 miR-143启动子区多态性与结直肠癌遗传易感性研究 | 第73-81页 |
| ·实验材料 | 第73-74页 |
| ·研究对象 | 第73页 |
| ·主要试剂 | 第73-74页 |
| ·主要仪器设备 | 第74页 |
| ·主要溶液的配制 | 第74页 |
| ·实验方法 | 第74-76页 |
| ·基因组DNA的提取 | 第74-75页 |
| ·HRM快速筛选差异性位点 | 第75-76页 |
| ·统计学方法 | 第76页 |
| ·实验结果 | 第76-78页 |
| ·HRM快速进行分型 | 第76-77页 |
| ·miR-143基因rs4705342 T>C与CRC发生风险的相关性的分析 | 第77-78页 |
| ·讨论 | 第78-79页 |
| ·本章分结论 | 第79-81页 |
| 全文结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-94页 |
| 综述 | 第94-121页 |
| 参考文献 | 第107-121页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
