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铝胁迫下丹波黑大豆醛脱氢酶基因GmALDH3-1的作用机理研究

摘要第1-6页
Abstract第6-12页
插图和附表清单第12-14页
缩略词第14-16页
第一章 绪言第16-31页
   ·酸性土壤及土壤中铝的形态第16-17页
     ·酸性土壤第16页
     ·土壤中铝的存在形态第16-17页
   ·铝对植物的毒害作用第17-18页
     ·造成植物铝毒害的机理第17页
     ·铝毒害下的氧化胁迫研究进展第17-18页
   ·植物耐铝的生理和分子机制研究进展第18-20页
     ·植物耐铝的生理机制研究进展第18-19页
     ·植物耐铝的分子机制研究进展第19-20页
   ·醛脱氢酶基因与逆境胁迫第20-29页
     ·生物体中醛的来源第20-21页
     ·植物ALDH基因家族及其分类第21-27页
     ·ALDH在植物应答逆境胁迫中的作用第27-28页
     ·ALDH的其他生物学功能第28-29页
   ·本研究的目的意义第29-31页
第二章 铝胁迫对RB和SB生理生化特性的影响第31-51页
   ·材料与方法第34-39页
     ·材料的培养与处理第35页
     ·测定指标与方法第35-37页
       ·可溶性总蛋白和可溶性糖含量第35-36页
       ·H_2O_2、MDA、PC、Pro含量第36-37页
       ·抗氧化酶CAT、POD、SOD活性第37页
     ·RB和SB根中总RNA的提取与RT-PCR分析第37-38页
     ·根尖的品红亚硫酸试剂染色第38-39页
     ·铝胁迫下RB和SB根系中醛类物质的制备和HPLC分析第39页
   ·结果与分析第39-51页
     ·不同浓度铝胁迫对RB和SB根中可溶性糖和可溶性总蛋白含量的影响第39-40页
     ·不同浓度铝胁迫对RB和SB根中PC、MDA、H_2O_2、Pro含量的影响第40-42页
     ·不同浓度铝胁迫对RB和SB根中POD、CAT、SOD活性的影响第42-43页
     ·铝胁迫下RB和SB根中ALDH基因的表达情况第43-44页
     ·不同浓度铝胁迫下RB和SB根的染色比较第44-46页
     ·不同浓度铝胁迫对RB和SB根中醛类含量的影响第46-49页
     ·讨论第49-51页
第三章 丹波黑大豆醛脱氢酶基因GmALDH3-1的原核表达和功能分析第51-64页
   ·材料与方法第51-56页
     ·植物材料第51-52页
     ·菌株、载体、酶等主要试剂第52页
     ·引物设计第52页
     ·RNA的提取以及ALDH基因的原核表达载体的构建第52-53页
     ·重组质粒pGEX-4T-1-ALDH在大肠杆菌中的表达第53-54页
     ·重组蛋白的纯化第54页
     ·ALDH蛋白的金属耐受性实验第54-55页
     ·ALDH蛋白生化特性分析第55-56页
   ·结果与分析第56-62页
     ·丹波黑大豆ALDH基因的克隆与分析第56页
     ·原核表达重组质粒的鉴定第56页
     ·重组质粒的诱导表达分析第56-58页
     ·ALDH的金属试验效果第58-61页
     ·ALDH蛋白的底物鉴定第61-62页
   ·讨论第62-64页
第四章 在烟草中过量表达丹波黑大豆醛脱氢酶增强转基因烟草对铝的耐受性第64-80页
   ·材料与方法第65-69页
     ·植物表达载体的构建第65-66页
     ·烟草的转化及转基因烟草的培养筛选第66页
     ·转基因烟草基因组的提取和PCR分析第66页
     ·转基因烟草RNA提取、RT-PCR和Western blot分析第66-67页
     ·铝胁迫下野生型烟草和转基因根的相对伸长量测定第67页
     ·铝胁迫下转基因烟草根中可溶性糖、H_2O_2、MDA、PC和Pro含量第67-68页
     ·铝胁迫下转基因烟草根中抗氧化酶活性测定第68页
     ·铝胁迫下野生型和转基因烟草根尖的铬天青和品红亚硫酸染色第68页
     ·铝胁迫下野生型和转基因烟草根中醛类物质制备和HPLP分析第68-69页
   ·结果与分析第69-78页
     ·转基因烟草中ALDH基因的插入情况及表达水平第69-70页
     ·过表达ALDH转基因烟草在铝胁迫下相关生理指标的变化第70-74页
     ·过表达ALDH转基因烟草在酸性土壤上生长表型的变化第74页
     ·铝胁迫下过表达ALDH转基因烟草和野生型烟草根部的染色效果比较第74-76页
     ·铝胁迫下过表达ALDH转基因烟草和野生型烟草根部的醛类变化第76-78页
   ·讨论第78-80页
第五章 总结与展望第80-82页
   ·总结第80-81页
   ·展望第81-82页
参考文献第82-92页
致谢第92-93页
附录A第93页

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