| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 英文縮略词表 | 第11-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-26页 |
| 1 TGEV研究概述 | 第18-21页 |
| ·病毒的形态结构 | 第18页 |
| ·基因组的结构特点 | 第18页 |
| ·S基因及其编码蛋白 | 第18-20页 |
| ·N基因及其编码蛋白 | 第20-21页 |
| ·其他蛋白 | 第21页 |
| 2 TGEV S基因基因工程疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| ·以腺病毒为载体的基因工程疫苗 | 第21-22页 |
| ·以细菌为载体的基因工程疫苗 | 第22页 |
| ·以转基因植物为载体的基因工程疫苗 | 第22-23页 |
| 3 减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究 | 第23-25页 |
| ·沙门氏菌的减毒 | 第23-24页 |
| ·减毒沙门氏菌的侵入及免疫应答机制 | 第24页 |
| ·以减毒沙门氏菌为载体的基因工程疫苗的研究 | 第24-25页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 研究部分 | 第26-76页 |
| 1 材料 | 第26-27页 |
| ·菌株、毒株及动物 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| 2 方法 | 第27-40页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的构建 | 第27-29页 |
| ·减毒沙门氏菌SL7207感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·真核表达质粒pVAXD-N-Sa电转化进入减毒沙门氏菌SL7207 | 第28页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的鉴定 | 第28-29页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的生物学特性鉴定 | 第29-32页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照菌株的革兰氏染色镜检 | 第29页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)及对照菌株的生长曲线测定 | 第29页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的体外稳定性 | 第29-30页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)携带的目的基因在体内的转录检测 | 第30-31页 |
| ·接种用菌液的制备与小鼠接种 | 第30页 |
| ·样品采集与细胞总RNA的提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR检测Sa、N基因在体内的转录 | 第30-31页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)口服免疫小鼠的稳定性 | 第31页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)口服免疫小鼠的安全性 | 第31-32页 |
| ·小鼠分组、免疫及样品采集 | 第31-32页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)口服免疫小鼠组织切片 | 第32页 |
| ·S_(BC)、N两种蛋白的表达纯化及反应原性鉴定 | 第32-35页 |
| ·S_(BC)、N表达菌株的复苏与表达 | 第32-33页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的大量表达及纯化 | 第33-34页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的大量表达 | 第33页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的初步洗涤纯化 | 第33-34页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的亲和层析纯化 | 第34页 |
| ·S_(BC)、N蛋白高免血清的制备及反应原性检测 | 第34-35页 |
| ·S_(BC)、N蛋白高免血清的制备 | 第34-35页 |
| ·琼脂双扩散法检测抗体效价 | 第35页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的Western-blot检测 | 第35页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的口服诱导规律 | 第35-40页 |
| ·小鼠分组与免疫 | 第35-36页 |
| ·样品采集 | 第36页 |
| ·免疫小鼠T淋巴细胞转化试验(MTT法) | 第36-37页 |
| ·免疫小鼠外周血T淋巴细胞转化试验 | 第36-37页 |
| ·免疫小鼠脾脏T淋巴细胞转化试验 | 第37页 |
| ·小鼠血清IgG抗体测定 | 第37页 |
| ·小鼠肠道黏膜抗体测定 | 第37-38页 |
| ·小鼠肠道黏膜IgG抗体测定 | 第38页 |
| ·小鼠肠道黏膜IgA抗体测定 | 第38页 |
| ·小鼠血清γ-干扰素水平测定 | 第38页 |
| ·小鼠血清IL-4水平测定 | 第38-40页 |
| 3. 结果与分析 | 第40-67页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的生物学特性鉴定 | 第41-49页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)与对照菌株的革兰氏染色镜检结果 | 第41-42页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)与对照菌株的生长曲线 | 第42-43页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)的体外稳定性 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR检测Sa、N基因在体内的转录 | 第44-45页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)口服免疫小鼠的稳定性 | 第45-46页 |
| ·菌株SL7207(pVAXD-N-Sa)口服免疫小鼠小肠、肝脏及脾脏病理变化 | 第46-49页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的纯化与反应原性鉴定 | 第49-53页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第49-51页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的纯化结果 | 第51页 |
| ·琼脂双扩散法检测抗体效价 | 第51-52页 |
| ·S_(BC)、N蛋白的Western-blot鉴定 | 第52-53页 |
| ·菌株SL7207(PVAXD-N-Sa)的口服免疫结果 | 第53-67页 |
| ·免疫小鼠T淋巴细胞增殖情况 | 第53-57页 |
| ·免疫小鼠外周血T淋巴细胞增殖情况 | 第53-55页 |
| ·免疫小鼠脾脏T淋巴细胞增殖情况 | 第55-57页 |
| ·小鼠血清IgG抗体测定结果 | 第57-59页 |
| ·小鼠肠道黏膜IgG抗体测定结果 | 第59-61页 |
| ·小鼠肠道黏膜IgA抗体测定结果 | 第61-64页 |
| ·小鼠血清γ-干扰素水平测定结果 | 第64-65页 |
| ·小鼠血清IL-4测定结果 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-75页 |
| ·关于双基因疫苗 | 第67-68页 |
| ·关于减毒沙门氏菌载体 | 第68页 |
| ·关于口服疫苗的安全性及稳定性 | 第68-70页 |
| ·关于蛋白表达诱导剂的选择 | 第70-71页 |
| ·关于蛋白纯化过程中的相关问题 | 第71-72页 |
| ·关于重组减毒沙门氏菌疫苗的口服免疫原性 | 第72-74页 |
| ·关于小鼠模型 | 第74-75页 |
| 5. 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 个人简历 | 第84-85页 |
| 附录 | 第85-87页 |
