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胡杨/灰杨一个尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因克隆及功能研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-9页
第一章 前言第9-18页
   ·植物糖代谢途径总述第9-10页
   ·尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)及其研究进展第10-17页
     ·UGPase的基本生物学功能第10-13页
     ·UGPase的拷贝数及同源性分析第13页
     ·UGPase三维结构模拟及结构分析第13-15页
     ·UGPase的定位及酶学特征第15-16页
     ·分子生物学研究第16-17页
   ·本实验的研究意义第17-18页
第二章 材料和方法第18-31页
   ·植物材料第18页
   ·质粒及菌株第18页
   ·酶与试剂盒第18页
   ·主要化学品第18-19页
   ·主要激素和抗生素第19页
   ·分析软件第19页
   ·主要的仪器设备第19页
   ·胡杨/灰杨叶片和愈伤组织总RNA提取第19-21页
     ·溶液配制第19-20页
     ·RNA提取注意事项第20页
     ·提取方法(LiCl沉淀法)第20-21页
     ·检测所提取的总RNA质量第21页
     ·测定所提取RNA的OD260值第21页
   ·用RT-PCR方法获得PeUGP和PrUGP全长基因第21-26页
     ·cDNA第一条链的合成第21-22页
     ·PCR反应第22-23页
     ·切胶回收PCR产物目的片段第23页
     ·将回收的PeUGP和PrUGP目的片段克隆到pMD18-TVector第23页
     ·感受态细胞制备第23-24页
     ·质粒转化第24页
     ·菌液PCR鉴定阳性克隆及测序第24-25页
     ·质粒提取第25-26页
   ·表达载体构建第26-27页
     ·质粒和载体分布酶切第26-27页
     ·连接反应第27页
     ·质粒转化及阳性克隆鉴定第27页
   ·胡杨/灰杨UGPase在愈伤组织中的基本生理特性分析第27-31页
     ·胡杨/灰杨愈伤组织继代第27-28页
     ·胡杨/灰杨愈伤组织盐胁迫处理第28-29页
     ·胡杨/灰杨愈伤组织总RNA提取和Na~+与K~+含量测定第29页
     ·实时荧光定量PCR第29-31页
第三章 研究结果第31-47页
   ·胡杨/灰杨继代愈伤组织第31页
   ·胡杨4个正选择候选基因(ESTs)注释信息第31-32页
   ·PeUGP和PrUGP表达信息第32页
   ·PeUGP和PrUGP Nr/Swissprot注释信息第32-33页
   ·胡杨/灰杨总RNA的提取第33-34页
   ·PeUGP和PrUGP cDNA序列全长扩增结果和序列分析第34-37页
   ·所有克隆PeUGPs和PrUGPs对应氨基酸序列比对差异结果第37-39页
   ·PeUGP和PrUGP稳定SNPs差异汇总第39-40页
   ·PeUGP和PrUGP系统发育树第40-41页
   ·PeUGPase和PrUGPase保守结构和三维结构模拟分析第41-43页
   ·盐胁迫下胡杨/灰杨Na~+,K~+离子含量及K~+/Na~+比第43-45页
   ·PeUGP和PrUGP Real-Time PCR结果第45-46页
   ·PeUGP和PrUGP TA载体和pET28(a~+)表达载体构建第46-47页
第四章 讨论第47-49页
   ·材料的选取第47页
   ·PeUGP和PrUGP扩增与进化分析第47-48页
   ·PeUGPase和PrUGPase功能分析第48-49页
第五章 结论第49-51页
附录:PeUGP和PrUGP所有克隆核苷酸序列比对结果第51-62页
参考文献第62-65页
在读期间参与学术成果第65-66页
致谢第66页

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