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成纤维细胞有丝分裂同步化条件的摸索及HSF-2基因在绒山羊染色体中的定位分析

摘要第1-4页
Abstract第4-10页
1 前言第10-17页
   ·内蒙古绒山羊的发展现状第10-11页
   ·绒山羊 Y 染色体的研究进展第11-12页
   ·热应激反应第12-15页
     ·热应激蛋白家族(HSPs)第13页
     ·热休克转录因子基因第13页
     ·热休克转录因子基因的类型和功能第13-14页
     ·热激转录因子的转录调控第14页
     ·热激转录因子的展望第14-15页
   ·荧光原位杂交(FISH)概述第15-16页
     ·荧光原位杂交(FISH)技术的建立第15页
     ·荧光原位杂交(FISH)的原理第15页
     ·荧光原位杂交(FISH)技术的应用第15-16页
     ·荧光原位杂交(FISH)在绒山羊上的研究与应用前景第16页
   ·本研究的目的和意义第16-17页
2 成纤维细胞的培养、染色体核型条件的优化及细胞悬液的制备第17-22页
   ·成纤维细胞的培养第17-19页
     ·实验材料第17-18页
     ·实验方法与操作步骤第18-19页
   ·染色体核型制备条件的优化第19-20页
     ·实验材料第19-20页
     ·实验方法第20页
   ·染色体悬液制备第20-22页
     ·实验耗材与试剂第20-21页
     ·实验方法与操作步骤第21-22页
3 HSF-2 基因在内蒙古绒山羊 Y 染色体上的荧光原位杂交定位第22-28页
   ·HSF-2 基因质粒提取第22-24页
     ·实验耗材与试剂第22-23页
     ·HSF-2 基因质粒提取步骤第23-24页
   ·HSF-2 基因的探针制备第24-25页
     ·随机引物标记法制备探针第24-25页
     ·探针预处理第25页
   ·荧光原位杂交第25-28页
     ·实验耗材与试剂第25-27页
     ·染色体标本变性第27页
     ·原位杂交第27页
     ·洗脱、免疫检测与信号放大第27-28页
     ·显微观察及显微照相第28页
     ·杂交信号的定位第28页
4 结果第28-33页
   ·成纤维细胞的培养第28-29页
   ·染色体核型制备条件的优化结果第29-31页
     ·正常细胞 G2/M 期比例第29页
     ·秋水仙碱不同作用时间下 G2/M 期所占比例第29-30页
     ·不同浓度 nocodazole 和不同处理时间下 G2/M 期所占比例第30-31页
   ·染色体核型制备结果第31-32页
   ·HSF-2 基因的 BAC 质粒提取鉴定第32页
   ·荧光原位杂交(FISH)结果第32-33页
5 讨论第33-38页
   ·成纤维细胞的培养第33-34页
     ·实验用具的清洗和消毒第33-34页
   ·有丝分裂同步化条件摸索第34-36页
     ·秋水仙碱对细胞周期同步化的作用研究第35页
     ·nocodazole 对细胞周期同步化的作用研究第35-36页
     ·有丝分裂抑制剂秋水仙碱和 nocodazole 的比较第36页
   ·影响染色体悬液制备的因素第36-37页
     ·影响染色体制片的因素第36-37页
   ·影响荧光原位杂交的主要因素第37-38页
     ·实验主要试剂与作用时间的摸索第37页
     ·荧光原位杂交洗脱时的注意事项第37页
     ·影响荧光原位杂交实验结果的其他因素第37-38页
6 结论与展望第38-39页
   ·结论第38页
   ·展望第38-39页
致谢第39-40页
参考文献第40-44页
作者简介第44页

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