| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-17页 |
| ·牛科及蒙古牛概述 | 第10-11页 |
| ·牛科动物特性及分布 | 第10页 |
| ·蒙古牛简介 | 第10-11页 |
| ·TGF-β家族及 Myostatin 基因 | 第11-14页 |
| ·Myostatin 基因的发现和 TGF-β超家族 | 第11-12页 |
| ·MSTN 基因的结构 | 第12页 |
| ·MSTN 基因的序列特异性 | 第12页 |
| ·MSTN 基因的表达特异性 | 第12-13页 |
| ·MSTN 基因的生物学功能 | 第13-14页 |
| ·转基因技术方法进展 | 第14-15页 |
| ·原核显微注射法 | 第14页 |
| ·病毒载体介导的转基因 | 第14页 |
| ·电转移技术 | 第14页 |
| ·胚胎干细胞介导的转基因 | 第14页 |
| ·转线粒体技术 | 第14页 |
| ·生殖细胞介导的转基因 | 第14-15页 |
| ·人工染色体传递基因 | 第15页 |
| ·转座子介导的哺乳动物转基因 | 第15页 |
| ·基因打靶的转基因方法 | 第15页 |
| ·转基因动物的检测 | 第15-16页 |
| ·染色体和基因水平 | 第16页 |
| ·转录水平 | 第16页 |
| ·翻译水平 | 第16页 |
| ·转基因动物整体水平的观察 | 第16页 |
| ·研究目的与意义 | 第16-17页 |
| 2 材料、仪器设备、药品耗材及试剂配制 | 第17-19页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·动物材料 | 第17页 |
| ·基因打靶质粒载体 | 第17页 |
| ·仪器设备 | 第17-18页 |
| ·药品及耗材 | 第18页 |
| ·试剂配制 | 第18-19页 |
| 3 方法 | 第19-24页 |
| ·实验一基因克隆 | 第19-20页 |
| ·实验二载体的构建及验证 | 第20页 |
| ·同源重组片段与过度载体的连接 | 第20页 |
| ·同源重组片段与载体 pFPC-1 的连接 | 第20页 |
| ·实验三转基因细胞系的建立 | 第20-24页 |
| ·蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞的原代、继代培养与成纤维细胞纯化 | 第20-21页 |
| ·细胞的冷冻保存和解冻复苏 | 第21页 |
| ·蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞 G418 耐药性的检测 | 第21-22页 |
| ·细胞转染用 MSTN 基因打靶质粒载体的准备 | 第22页 |
| ·阳离子脂质体介导的细胞转染 | 第22-23页 |
| ·细胞克隆的筛选、扩繁 | 第23页 |
| ·转基因细胞的鉴定 | 第23-24页 |
| 4 结果 | 第24-32页 |
| ·实验一基因克隆 | 第24-25页 |
| ·实验二载体的构建及验证 | 第25-27页 |
| ·同源重组片段与过度载体的连接 | 第25页 |
| ·同源重组片段与载体 pFPC-1 的连接 | 第25-27页 |
| ·实验三转基因细胞系的建立 | 第27-32页 |
| ·原代培养、传代培养与成纤维细胞纯化 | 第27-28页 |
| ·蒙古牛胎儿皮肤成纤维细胞的 G418 耐药性 | 第28-29页 |
| ·基因打靶质粒载体的酶切线性化 | 第29页 |
| ·细胞克隆的筛选、扩繁和冻存以及转染前后细胞状态的改变 | 第29-30页 |
| ·引物设计，合成与鉴定 | 第30页 |
| ·细胞克隆基因组 DNA 水平的鉴定 | 第30-32页 |
| 5 讨论 | 第32-35页 |
| ·载体的构建 | 第32-33页 |
| ·胎儿皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第33页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第33-34页 |
| ·转染效率 | 第34页 |
| ·G418 筛选策略及细胞克隆生长状态的改变 | 第34页 |
| ·影响基因打靶效率的因素 | 第34-35页 |
| ·细胞基因组 DNA 的提取 | 第35页 |
| ·PCR 扩增及电泳检测结果的分析 | 第35页 |
| 6 结论 | 第35-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-41页 |
| 附录 | 第41-44页 |
| 作者简介 | 第44页 |
