中文摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-12页 |
前言 | 第12-14页 |
材料和方法 | 第14-43页 |
1 实验材料 | 第14-23页 |
·细胞 | 第14页 |
·菌株和质粒 | 第14页 |
·主要试剂 | 第14-17页 |
·主要仪器 | 第17-18页 |
·主要试剂配制 | 第18-23页 |
2 实验方法 | 第23-43页 |
·目的片段 PDGF- GAL 的扩增 | 第23-24页 |
·重组质粒PMDT-PDGF-GAL的构建及鉴定 | 第24-28页 |
·重组表达质粒PCDNA 3.1-PDGF-GAL的构建 | 第28-30页 |
·NEURO - 2 A细胞的常规培养 | 第30-31页 |
·细胞生长曲线的绘制 ( MTT 法) | 第31页 |
·P CDNA 3.1-PDGF-GAL 瞬时转 染 NEURO- 2A(LIPFECTAMINE~(TM)2000 转染试剂 ) | 第31-32页 |
·建立稳定转染小鼠 PDGF-GAL 的 NEURO-2A 细胞系: | 第32-33页 |
·细胞转录水平的鉴定(包括瞬时转染后和稳转单克隆细胞) | 第33-36页 |
·转染 后 GA L 蛋白水平的测定 | 第36-41页 |
·内源性过表达 GA L 对 NE U RO -2 A细胞的增殖分析 | 第41页 |
·内源性过表达 GA L 对 NE U RO -2 A细胞周期的分析 | 第41-42页 |
·统计学处理 | 第42-43页 |
结果 | 第43-52页 |
1 重组质粒PMDT-PDGF-GAL的鉴定 | 第43页 |
2 重组表达质粒PCDNA-PDGF-GAL的鉴定 | 第43-44页 |
3 NEURO-2A细胞生长曲线的绘制 | 第44-45页 |
4 脂质体法转染后GAL转录水平的鉴定 | 第45-47页 |
·瞬时转染后不同时间段GAL转录水平测定 | 第45-46页 |
·稳转后不同细胞克隆中转录水平的鉴定 | 第46-47页 |
5 脂质体法转染后GAL蛋白表达水平的鉴定 | 第47-48页 |
·瞬时转染后不同时间 GAL 表达水平 | 第47-48页 |
·细胞克隆中GAL 表达水平的鉴定 | 第48页 |
6 内源性过表达 GAL 对 NEURO-2A 细胞的增殖分析 | 第48-49页 |
7 内源性过表达 GAL 对 NEURO-2A 细胞周期分析 | 第49-50页 |
8 内源性过表达GAL以及外源GAL对NEURO-2A细胞的凋亡分析 | 第50-51页 |
9 转染前后细胞形态的变化 | 第51-52页 |
讨论 | 第52-56页 |
结论 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-60页 |
综述 | 第60-69页 |
参考文献 | 第67-69页 |
个人简历 | 第69-70页 |
致谢 | 第70页 |