| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略语 | 第8-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-31页 |
| 1 昆虫抗冻蛋白的研究进展 | 第12-19页 |
| ·抗冻蛋白简介 | 第12页 |
| ·昆虫抗冻蛋白结构 | 第12-13页 |
| ·昆虫抗冻蛋白功能 | 第13-15页 |
| ·冷诱导相关蛋白在生物体耐寒性方面的研究 | 第15-19页 |
| 2.动力蛋白轻链的研究进展 | 第19-22页 |
| ·动力蛋白简介 | 第19-20页 |
| ·动力蛋白轻链相互作用蛋白的研究进展 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-31页 |
| 第二部分 实验部分 | 第31-74页 |
| 第一章 与小胸鳖甲抗冻蛋白MpAFP149相互作用蛋白质的筛选 | 第31-61页 |
| 1 材料及试剂 | 第31-32页 |
| ·试虫 | 第31页 |
| ·菌株和质粒 | 第31页 |
| ·试剂 | 第31-32页 |
| ·主要实验仪器 | 第32页 |
| 2 方法 | 第32-42页 |
| ·pGBKT7-Mpafp149 诱饵质粒的构建与鉴定 | 第32-35页 |
| ·引物设计 | 第32-33页 |
| ·小胸鳖甲抗冻蛋白基因 Mpafp149 的扩增与 pGBKT7 载体的线性化 | 第33-34页 |
| ·重组质粒 pGBKT7-Mpafp149 的获得与鉴定 | 第34-35页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·pGBKT7-Mpafp149 对于酵母感受态细胞 Y2HGold 的转化 | 第35-36页 |
| ·酵母质粒 pGBKT7-Mpafp149 的提取 | 第36-37页 |
| ·pGBKT7-Mpafp149/Y2HGold 阳性克隆的筛选 | 第37页 |
| ·诱饵蛋白表达检测 | 第37-38页 |
| ·蛋白提取 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 及 Western blot | 第37-38页 |
| ·诱饵蛋白的自激活检测 | 第38-39页 |
| ·小胸鳖甲 cDNA 文库的构建 | 第39-40页 |
| ·小胸鳖甲总 RNA 的提取及 mRNA 的分离 | 第39页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第39页 |
| ·LD-PCR 扩增 dscDNA 及其纯化 | 第39-40页 |
| ·酵母双杂交 | 第40-42页 |
| ·MpDLC2 与 Mpprey9 的序列分析 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-57页 |
| ·pGBKT7-Mpafp149 诱饵质粒的构建与鉴定 | 第42-43页 |
| ·诱饵蛋白 pGBKT7-MpAFP149 的自激活检测 | 第43-44页 |
| ·诱饵蛋白 pGBKT7-MpAFP149 的表达检测 | 第44-45页 |
| ·酵母双杂交中筛选文库的构建 | 第45页 |
| ·酵母双杂交初步筛选结果 | 第45-46页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆中插入片段的初步鉴定 | 第46-47页 |
| ·酵母菌株中阳性克隆质粒插入片段的 PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌 DH5α中阳性克隆插入片段的菌液 PCR 鉴定 | 第47页 |
| ·测序结果分析 | 第47-50页 |
| ·酵母质粒回转实验 | 第50-51页 |
| ·MpDLC2 与 Mpprey9 的序列分析 | 第51-57页 |
| ·Mpprey9 的序列分析 | 第51-53页 |
| ·MpDLC2 的序列分析 | 第53-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 5.参考文献 | 第59-61页 |
| 第二章 小胸鳖甲抗冻蛋白 MpAFP149 与动力蛋白轻链 2 的体外相互作用研究 | 第61-74页 |
| 1 材料及试剂 | 第61-62页 |
| ·试虫 | 第61页 |
| ·菌株和质粒 | 第61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·主要实验仪器 | 第61-62页 |
| 2.方法 | 第62-66页 |
| ·重组质粒 pGEX4T-Mpdlc2 的构建 | 第62-63页 |
| ·Mpdlc2 基因片段的扩增 | 第62页 |
| ·重组质粒 pGEX4T-Mpdlc2 的获得 | 第62-63页 |
| ·重组质粒 pET28a-Mpafp149 的构建 | 第63-64页 |
| ·Mpafp149 基因片段的扩增 | 第63页 |
| ·重组质粒 pET28a-Mpafp149 的获得 | 第63-64页 |
| ·GST-MpDLC2 和 His-MpAFP149 蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第64页 |
| ·利用 Glutathione Sepharose4B 亲和层析纯化 GST-MpDLC2 融合蛋白 | 第64页 |
| ·利用镍柱亲和层析纯化 His-MpAFP149 融合蛋白 | 第64页 |
| ·MpDLC2 与 MpAFP149 的体外 GST-Pulldown 实验 | 第64-66页 |
| ·谷胱甘肽-琼脂糖树脂的处理 | 第64-65页 |
| ·结合 GST 蛋白 | 第65页 |
| ·探测 His-MpAFP149 | 第65-66页 |
| 3.结果 | 第66-71页 |
| ·pGEX4T-Mpdlc2 的构建 | 第66-67页 |
| ·pET28a-Mpafp149 的构建 | 第67-68页 |
| ·GST-MpDLC 蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第68-70页 |
| ·His-MpAFP149 蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第70页 |
| ·MpDLC2 与 MpAFP149 的 GST-Pulldown 分析 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-72页 |
| 5 参考文献 | 第72-74页 |
| 第三部分 结论与展望 | 第74-76页 |
| 第四部分 附录 | 第76-80页 |
| 附录一 硕士期间参加的研究课题和发表论文 | 第76-77页 |
| 附录二 常用试剂配制方法 | 第77-79页 |
| 附录三 个人简历 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
