| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| ·牛传染性鼻气管炎 | 第10-15页 |
| ·牛传染性鼻气管炎病毒病原学 | 第10-11页 |
| ·IBRV流行病学 | 第11-12页 |
| ·IBRV的预防和控制 | 第12-14页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的诊断方法的研究进展 | 第14-15页 |
| ·单核/巨噬细胞 | 第15-17页 |
| ·单核/巨噬细胞的分化成熟及组织分布 | 第15页 |
| ·巨噬细胞的生物学功能 | 第15-17页 |
| ·细胞因子研究概况 | 第17-18页 |
| ·细胞因子的特点 | 第17-18页 |
| ·IL-2及IFN的功能 | 第18页 |
| ·单核巨噬细胞与病毒感染的关系 | 第18-19页 |
| ·研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 检测IBRV gE基因常规PCR和荧光定量PCR方法的建立 | 第20-31页 |
| ·材料方法 | 第20-21页 |
| ·病毒和细胞 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·试验溶液 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·IBRV引物设计 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-24页 |
| ·MDBK细胞培养 | 第21页 |
| ·病毒培养 | 第21-22页 |
| ·TCID_(50)测定 | 第22页 |
| ·模板DNA的制备 | 第22页 |
| ·常规PCR检测方法的建立 | 第22-23页 |
| ·IBRV荧光定量PCR检测方法的建立 | 第23页 |
| ·常规PCR与荧光定量PCR灵敏性、特异性检测 | 第23页 |
| ·模拟临床样品检测 | 第23-24页 |
| ·结果 | 第24-29页 |
| ·病毒培养结果 | 第24页 |
| ·TCID_(50)测定结果 | 第24-25页 |
| ·IBRV目的片段的PCR扩增及鉴定 | 第25页 |
| ·常规PCR反应的特异性 | 第25-26页 |
| ·荧光定量PCR反应的特异性 | 第26页 |
| ·常规PCR反应的灵敏性 | 第26-27页 |
| ·IBRV荧光定量PCR标准曲线建立及灵敏性检测 | 第27-28页 |
| ·模拟临床样品的检测结果 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 3 检测牛单核巨噬细胞表达IL-2与IFN-γ荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第31-40页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·主要试验试剂 | 第31页 |
| ·主要试验仪器 | 第31页 |
| ·引物的设计合成 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-35页 |
| ·PBMC的分离与单核巨噬细胞培养 | 第32页 |
| ·单核巨噬细胞总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·单核巨噬细胞总RNA的反转录 | 第33-34页 |
| ·IL-2、IFN-γ及β-actin的鉴定 | 第34页 |
| ·IL-2、IFN-γ及β-actin荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第34-35页 |
| ·结论与分析 | 第35-37页 |
| ·单核巨噬细胞培养结果 | 第35页 |
| ·IL-2、IFN-γ及β-actin的鉴定结果 | 第35-36页 |
| ·荧光定量PCR方法标准曲线建立结果 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·本试验内参基因的确定 | 第37-38页 |
| ·引物二聚体对实时荧光定量PCR的影响 | 第38页 |
| ·荧光定量PCR结果分析方法的确定 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 4 荧光定量PCR检测IBRV感染牛单核巨噬细胞后IL-2与IFN-Y的动态变化 | 第40-45页 |
| ·材料与方法 | 第40-41页 |
| ·试验材料 | 第40页 |
| ·试验方法 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·IL-2表达水平 | 第41-42页 |
| ·IFN-γ表达水平 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
