| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 符号说明 | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| 1 猪流行性腹泻病毒病原学、流行病学、分子生物学特征及其疫苗的研究进展 | 第14-20页 |
| ·病原学 | 第14-15页 |
| ·流行病学 | 第15-16页 |
| ·分子生物学 | 第16-18页 |
| ·基因组结构及其编码蛋白 | 第16-17页 |
| ·S基因及其编码蛋白研究进展 | 第17-18页 |
| ·PED疫苗研究进展 | 第18-20页 |
| ·灭活疫苗 | 第18-19页 |
| ·弱毒疫苗 | 第19页 |
| ·重组活病毒载体疫苗 | 第19页 |
| ·转基因植物疫苗 | 第19-20页 |
| ·重组乳酸菌疫苗 | 第20页 |
| 2 减毒沙门氏菌作为基因疫苗载体的研究现状 | 第20-24页 |
| ·减毒猪霍乱沙门氏菌作为基因疫苗载体的研究 | 第21-22页 |
| ·国外研究现状 | 第21页 |
| ·国内研究现状 | 第21-22页 |
| ·减毒猪霍乱沙门氏菌载体的优点和潜在威胁 | 第22-24页 |
| 本研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒S蛋白抗原表位串联基因的构建及其原核表达 | 第25-39页 |
| 1 材料与方法 | 第25-34页 |
| ·实验材料 | 第25-26页 |
| ·生物材料及试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·主要溶液配制 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-34页 |
| ·引物设计和合成 | 第26页 |
| ·猪流行性腹泻病毒总RNA的提取 | 第26-27页 |
| ·两步法RT-PCR扩增PEDV S蛋白两个中和表位区片段 | 第27-28页 |
| ·目的片段的回收 | 第28页 |
| ·目的基因的T-A克隆 | 第28-30页 |
| ·重组质粒pMD-SAB的构建 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pET-SAB的构建 | 第31-32页 |
| ·重组表达菌株的制备、培养及诱导表达 | 第32-33页 |
| ·表达蛋白的可溶性检测 | 第33页 |
| ·重组表达融合蛋白的SDS-PAGE电泳研究 | 第33-34页 |
| 2 结果 | 第34-37页 |
| ·SA、SB片段的RT-PCR扩增及T-A克隆 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pMD-SAB和pET-SAB构建 | 第35-36页 |
| ·串联基因SAB的序列分析 | 第36-37页 |
| ·重组菌诱导表达、纯化、SDS-PAGE和Western-blot分析 | 第37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 运送PEDV S蛋白抗原表位重组真核质粒的减毒沙门氏菌的构建及其小鼠免疫实验 | 第39-58页 |
| 1 材料与方法 | 第39-40页 |
| ·试验材料 | 第39-40页 |
| ·菌株与质粒 | 第39-40页 |
| ·工具酶和试剂盒 | 第40页 |
| ·实验动物 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-47页 |
| ·重组沙门氏菌的构建 | 第40-44页 |
| ·引物设计和合成 | 第40页 |
| ·真核表达载体pVAX1-SA的构建 | 第40-42页 |
| ·真核表达载体pVAX1-SAB的构建 | 第42-43页 |
| ·重组质粒转染Vero细胞 | 第43页 |
| ·目的基因的表达检测 | 第43-44页 |
| ·pVAX1-SA和pVAX1-SAB转化入减毒沙门氏菌S.C 500 | 第44页 |
| ·TSS法制备S.C 500感受态细胞 | 第44页 |
| ·重组菌S.C 500/pVAX1-SA和S.C 500/pVAX1-SAB的构建 | 第44页 |
| ·重组菌S.C 500/pVAX1-SA和S.C 500/pVAX1-SAB的鉴定 | 第44页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠的安全性试验 | 第44-45页 |
| ·重组沙门氏菌的体外稳定性试验 | 第45页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠不同组织的侵袭力及消长变化 | 第45页 |
| ·重组沙门氏菌的小鼠免疫实验 | 第45-47页 |
| ·肌注免疫真核质粒pVAX1、pVAX1-SA和pVAX1-SAB的制备 | 第45页 |
| ·口服免疫重组沙门氏菌的制备 | 第45页 |
| ·实验小鼠分组与免疫程序 | 第45-46页 |
| ·小鼠血清中PEDV抗体测定 | 第46-47页 |
| ·小鼠粘膜和粪便中PEDV特异性IgA抗体测定 | 第47页 |
| ·小鼠血清中PEDV特异性IgG抗体亚类测定 | 第47页 |
| 3 结果 | 第47-54页 |
| ·重组质粒pVAX1-SA的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pVAX1-SAB的构建 | 第48-49页 |
| ·目的基因的细胞内表达检测 | 第49-50页 |
| ·重组沙门氏菌的构建 | 第50页 |
| ·重组沙门氏菌安全性试验 | 第50-51页 |
| ·重组沙门氏菌体外稳定性试验 | 第51-52页 |
| ·重组沙门氏菌对小鼠不同组织的侵袭性及消长变化 | 第52页 |
| ·小鼠PEDV特异性抗体测定 | 第52-54页 |
| ·小鼠血清PEDV特异性IgG抗体亚类测定 | 第54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 全文总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
