| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 前言 | 第13-29页 |
| 1 第二代生物燃料作物芒的应用潜力 | 第13-15页 |
| ·发展可再生能源的必要性 | 第13页 |
| ·生物燃料的发展趋势 | 第13-14页 |
| ·芒的应用潜力 | 第14-15页 |
| 2 β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第15-17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的理化性质 | 第15-16页 |
| ·新的β-葡萄糖苷酶的发现 | 第16-17页 |
| 3 瘤胃未培养微生物蕴含着巨大的可开发资源 | 第17-22页 |
| ·瘤胃微生物组成 | 第18-22页 |
| ·芒草驯养对发掘牛瘤胃微生物纤维素降解酶的意义 | 第22页 |
| 4 宏基因组学是开发利用未培养微生物资源的重要途径 | 第22-27页 |
| ·宏基因组学研究策略 | 第22-23页 |
| ·宏基因组学技术应用现状 | 第23-24页 |
| ·宏基因组学技术目前存在的问题 | 第24-27页 |
| 5 本论文立题依据、研究目标及技术路线 | 第27-29页 |
| ·立题依据 | 第27页 |
| ·研究目标 | 第27-28页 |
| ·技术路线 | 第28-29页 |
| 第一章 芒草驯养对黄牛瘤胃微生物群落的影响 | 第29-55页 |
| 1 材料与方法 | 第29-35页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·高分子量瘤胃微生物总DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·PCR反应体系及条件 | 第32-33页 |
| ·16S rRNA和18S rRNA基因克隆文库的构建 | 第33-35页 |
| ·生物信息学分析及系统进化树的构建 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-51页 |
| ·瘤胃微生物16S rRNA、18S rRNA基因文库的构建 | 第35-41页 |
| ·瘤胃微生物总DNA的提取 | 第35-36页 |
| ·瘤胃细菌16S rRNA基因扩增及阳性克隆的鉴定 | 第36-37页 |
| ·瘤胃古菌16S rRNA基因扩增及阳性克隆的鉴定 | 第37-38页 |
| ·瘤胃真菌18S rRNA基因扩增及阳性克隆的鉴定 | 第38-39页 |
| ·核糖体DNA扩增片段限制性内切酶分析结果 | 第39-41页 |
| ·16S rRNA基因多样性 | 第41-47页 |
| ·18S rRNA基因多样性 | 第47页 |
| ·不同饲养条件下牛瘤胃细菌、古菌、真菌的比较 | 第47-51页 |
| 3 讨论 | 第51-55页 |
| 第二章 芒草驯养黄牛瘤胃微生物宏基因组Fosmid文库的构建及β-葡萄糖苷酶新基因的克隆与表达研究 | 第55-90页 |
| 1 材料与方法 | 第55-69页 |
| ·实验材料 | 第55-57页 |
| ·实验方法 | 第57-69页 |
| ·高分子量瘤胃微生物宏总DNA的提取 | 第57页 |
| ·宏基因组DNA的纯化 | 第57-58页 |
| ·瘤胃微生物宏基因组文库构建 | 第58-60页 |
| ·Fosmid文库的保存 | 第60页 |
| ·Fosmid文库稳定性及文库效率的评价 | 第60-62页 |
| ·Fosmid文库的筛选 | 第62页 |
| ·亚克隆文库的构建和筛选 | 第62-63页 |
| ·Unglu135B12的原核表达 | 第63-64页 |
| ·诱导表达条件的优化 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE | 第65-66页 |
| ·Unglu135B12的纯化 | 第66-67页 |
| ·纯化蛋白质功能验证 | 第67页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶学性质研究 | 第67-69页 |
| 2 结果与分析 | 第69-86页 |
| ·Fosmid文库构建和筛选 | 第69-73页 |
| ·瘤胃微生物宏基因组DNA的提取和纯化 | 第69-70页 |
| ·插入片段大小的验证 | 第70页 |
| ·文库稳定性的评价 | 第70-71页 |
| ·文库效率的评价 | 第71-72页 |
| ·Fosmid文库随机测序结果 | 第72页 |
| ·Fosmid文库的筛选 | 第72-73页 |
| ·135B12亚克隆文库的构建及筛选 | 第73-78页 |
| ·135B12亚克隆文库筛选结果 | 第73-74页 |
| ·亚克隆135-138插入片段的测序及分析 | 第74-76页 |
| ·Unglu135B12系统进化分析 | 第76-78页 |
| ·Unglu135B12的原核表达 | 第78-83页 |
| ·pUC19-unglu135B12与表达载体酶切结果 | 第78页 |
| ·pET-unglu135B12酶切及菌液PCR验证 | 第78页 |
| ·含pET-unglu135B12阳性克隆的功能验证 | 第78-79页 |
| ·Unglu135B12蛋白质电泳及western检测 | 第79-80页 |
| ·诱导条件的优化 | 第80-83页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶学性质的研究 | 第83-86页 |
| ·β-葡萄糖苷酶最适反应温度的确定 | 第83页 |
| ·β-葡萄糖苷酶最适pH的确定 | 第83-84页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的热稳定性 | 第84-85页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的pH稳定性 | 第85页 |
| ·金属离子对酶活力的影响 | 第85-86页 |
| ·β-葡萄糖苷酶反应动力学的研究 | 第86页 |
| 3 讨论 | 第86-90页 |
| ·Fosmid文库的构建 | 第86-87页 |
| ·文库筛选 | 第87-88页 |
| ·开发瘤胃微生物纤维素酶的潜力 | 第88-89页 |
| ·新的β-葡萄糖苷酶的发现 | 第89页 |
| ·新的β-葡萄糖苷酶的酶学性质 | 第89-90页 |
| 结论、创新点及下一步工作计划 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-100页 |
| 附录 | 第100-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 作者简历 | 第124-125页 |
