| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 插图清单 | 第14-16页 |
| 缩略词表 | 第16-19页 |
| 文献综述 | 第19-54页 |
| 1 细胞核重编程技术 | 第19-23页 |
| ·体细胞核移植 | 第20-21页 |
| ·体细胞与多潜能干细胞融合 | 第21-22页 |
| ·体细胞与多能性细胞提取物共孵育 | 第22-23页 |
| 2 iPS 细胞系的建立及其优化方案 | 第23-36页 |
| ·限定因子的选择 | 第23-27页 |
| ·限定因子的发现 | 第23-25页 |
| ·限定因子的选择和小分子的应用 | 第25-27页 |
| ·限定因子运载系统 | 第27-31页 |
| ·靶细胞类型的选择 | 第31-32页 |
| ·限定因子的表达参数 | 第32-33页 |
| ·获取iPS 细胞的培养条件 | 第33-34页 |
| ·iPS 细胞克隆的识别 | 第34-35页 |
| ·iPS 细胞克隆的鉴定 | 第35-36页 |
| 3 iPS 细胞建立的模型假说 | 第36-39页 |
| ·原种模型假说 | 第36-37页 |
| ·已决定原种模型 | 第37页 |
| ·诱导原种模型 | 第37页 |
| ·随机模型假说 | 第37-39页 |
| 4 iPS 细胞建立的分子机制 | 第39-49页 |
| ·限定因子诱导多能性的可能机制 | 第40-45页 |
| ·四种限定因子简介 | 第40-42页 |
| ·Oct4/Sox2/Nanog 自动调节环及转录调控网络 | 第42-43页 |
| ·ES 细胞的信号转导通路 | 第43-44页 |
| ·限定因子诱导多能性的可能机制 | 第44-45页 |
| ·iPS 细胞表观遗传特征建立的可能机制 | 第45-47页 |
| ·ES 细胞的表观遗传特征 | 第45-46页 |
| ·iPS 细胞建立的表观遗传特征要求及可能机制 | 第46-47页 |
| ·iPS 细胞产生过程中的可能分子机制 | 第47-49页 |
| ·重编程进程中细胞分子特征变化 | 第47-48页 |
| ·重编程进程中的可能分子机制 | 第48-49页 |
| 5 ES 细胞与iPS 细胞差异 | 第49-50页 |
| 6 iPS 细胞的应用前景 | 第50-52页 |
| ·iPS 细胞应用于治疗的前景 | 第50-51页 |
| ·iPS 细胞在家畜上的应用前景 | 第51-52页 |
| 7 展望 | 第52-54页 |
| 研究论文 | 第54-57页 |
| 第一章 限定因子慢病毒表达载体的构建 | 第57-82页 |
| 摘要 | 第57页 |
| 前言 | 第57-58页 |
| 1 材料与方法 | 第58-67页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·溶液配制 | 第58-59页 |
| ·引物合成和DNA 测序 | 第59页 |
| ·试验仪器、分子试剂及试剂盒 | 第59-60页 |
| ·方法 | 第60-67页 |
| ·限定因子基因的克隆 | 第60-64页 |
| ·限定因子基因逆转录病毒载体的构建 | 第64-65页 |
| ·pLL3.7 慢病毒载体的改造 | 第65-66页 |
| ·限定因子慢病毒载体的构建 | 第66-67页 |
| ·重组质粒在293T 细胞中的表达 | 第67页 |
| 2 结果 | 第67-78页 |
| ·限定因子基因克隆和测序的结果 | 第67-68页 |
| ·限定因子基因克隆的结果 | 第67-68页 |
| ·限定因子基因测序的结果 | 第68页 |
| ·重组逆转录病毒载体构建的结果 | 第68-69页 |
| ·pLL3.7 慢病毒载体改造的结果 | 第69页 |
| ·重组慢病毒载体构建的结果 | 第69页 |
| ·质粒转染293T 细胞的结果 | 第69-78页 |
| 3 讨论 | 第78-81页 |
| ·关于限定因子基因克隆 | 第78-80页 |
| ·关于重组慢病毒载体质粒的构建 | 第80-81页 |
| 4 小结 | 第81-82页 |
| 第二章 限定因子慢病毒诱导猪iPS 细胞的建立和鉴定 | 第82-104页 |
| 摘要 | 第82页 |
| 前言 | 第82-84页 |
| 1 材料与方法 | 第84-92页 |
| ·材料 | 第84页 |
| ·溶液配制 | 第84-85页 |
| ·仪器及耗材 | 第85页 |
| ·方法 | 第85-92页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞系（PFFs）的建立 | 第85-87页 |
| ·饲养层的制备 | 第87-88页 |
| ·慢病毒的包装、收集浓缩和感染 | 第88-89页 |
| ·限定因子慢病毒诱导猪胎儿成纤维细胞的重构 | 第89页 |
| ·猪iPS 细胞的传代培养 | 第89页 |
| ·猪iPS 细胞的冻存 | 第89-90页 |
| ·猪iPS 细胞的复苏 | 第90页 |
| ·碱性磷酸酶染色 | 第90页 |
| ·免疫荧光染色分析 | 第90-91页 |
| ·细胞染色体计数分析 | 第91页 |
| ·RT-PCR 检测 | 第91-92页 |
| ·体内分化检测 | 第92页 |
| 2 结果 | 第92-99页 |
| ·猪胎儿成纤维细胞系建立的结果 | 第92-93页 |
| ·猪iPS 细胞建立的结果 | 第93页 |
| ·猪iPS 细胞鉴定的结果 | 第93-99页 |
| ·猪iPS 细胞表达了碱性磷酸酶 | 第93页 |
| ·猪iPS 细胞有多能性基因的表达 | 第93-94页 |
| ·猪iPS 细胞核型正常 | 第94页 |
| ·猪iPS 细胞有ES 细胞特异性分子标记的表达 | 第94页 |
| ·猪iPS 细胞有多向分化潜能 | 第94-99页 |
| 3 讨论 | 第99-103页 |
| ·关于靶细胞的选择 | 第99页 |
| ·关于建立的猪胎儿成纤维细胞系 | 第99-100页 |
| ·关于选择的限定因子 | 第100页 |
| ·关于猪iPS 细胞诱导和维持培养液的确定 | 第100-101页 |
| ·关于猪iPS 细胞的诱导效率 | 第101页 |
| ·关于猪iPS 细胞特征 | 第101-103页 |
| 4 小结 | 第103-104页 |
| 第三章 限定因子重组蛋白重编程猪胎儿成纤维细胞的初步探讨 | 第104-119页 |
| 摘要 | 第104页 |
| 前言 | 第104-105页 |
| 1 材料与方法 | 第105-109页 |
| ·材料 | 第105页 |
| ·溶液配制与分子试剂 | 第105-106页 |
| ·仪器及耗材 | 第106页 |
| ·方法 | 第106-109页 |
| ·限定因子-R9 原核蛋白表达载体的构建 | 第106-107页 |
| ·限定因子-R9 原核蛋白的诱导表达 | 第107页 |
| ·限定因子R9 原核蛋白的提取纯化 | 第107-108页 |
| ·限定因子R9 原核蛋白对猪胎儿成纤维细胞的重构 | 第108页 |
| ·重构细胞的碱性磷酸酶染色 | 第108页 |
| ·重构细胞的免疫荧光染色分析 | 第108-109页 |
| 2 结果 | 第109-116页 |
| ·限定因子-R9 原核蛋白表达载体构建的结果 | 第109页 |
| ·限定因子-R9 原核蛋白的诱导表达及SDS-PAGE 检测的结果 | 第109页 |
| ·限定因子-R9 原核蛋白对猪胎儿成纤维细胞的重构结果 | 第109-116页 |
| 3 讨论 | 第116-118页 |
| ·关于限定因子-R9 原核蛋白载体的构建及重组蛋白的转导活性 | 第116页 |
| ·关于限定因子-R9 原核蛋白对猪胎儿成纤维细胞的重构 | 第116-118页 |
| 4 小结 | 第118-119页 |
| 全文结论 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 作者简介 | 第137页 |
