| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-16页 |
| 符号说明 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-20页 |
| 第一部分:let-7a2启动子的克隆及活性测定 | 第20-46页 |
| 1.材料 | 第20-22页 |
| ·试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.方法 | 第22-35页 |
| ·细胞培养 | 第22页 |
| ·5'cDNA末端快速扩增技术(5'RACE) | 第22-25页 |
| ·let-7a2启动子-荧光素酶报道基因质粒(pGL3-p7a2)的构建 | 第25-29页 |
| ·let-7a2启动子活性的检测 | 第29-30页 |
| ·9-cis-RA、AT-RA、LiCl、Dex、1,25-(OH)_2D_3对let-7a2启动子活性的影响 | 第30页 |
| ·RT-PCR检测9-cis-RA、AT-RA、LiCl、Dex、1,25-(OH)_2D_3对A549细胞中let-7a2表达的影响 | 第30-32页 |
| ·let-7a2靶序列-荧光素酶报告基因检测9-cis-RA、AT-RA、LiCl、Dex对A549细胞中let-7a2表达的作用 | 第32-35页 |
| 3.结果 | 第35-43页 |
| ·let-7a2转录起始点的定位 | 第35-36页 |
| ·let-7a2启动子-荧光素酶报道基因质粒(pGL3-p7a2)的酶切鉴定及测序 | 第36-37页 |
| ·let-7a2启动子活性的检测 | 第37页 |
| ·let-7a2启动子活性调节 | 第37-43页 |
| 4.讨论 | 第43-45页 |
| 第一部分 总结 | 第45-46页 |
| 第二部分:1,25-二羟维生素D_3上调let-7a2表达的机制研究 | 第46-71页 |
| 1.材料 | 第46-47页 |
| ·试剂 | 第46-47页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| 2.方法 | 第47-56页 |
| ·let-7a2上游VDR反应元件(VDRE)-绿色荧光蛋白报道基因质粒的构建 | 第47-50页 |
| ·绿色荧光蛋白报道基因活性检测 | 第50页 |
| ·电泳迁移率改变检测(EMSA) | 第50-54页 |
| ·染色质免疫共沉淀分析(ChIP) | 第54-56页 |
| ·RT-PCR检测let-7a2与VDR的表达 | 第56页 |
| 3.结果 | 第56-68页 |
| ·VDRE-绿色荧光蛋白报道基因质粒的鉴定及绿色荧光蛋白的表达 | 第57-63页 |
| ·EMSA鉴定在1,25-(OH)_2D_3的作用下VDR与VDRE的结合 | 第63-64页 |
| ·ChIP鉴定1,25-(OH)_2D_3/VDR与let-7a2上游VDRE的结合作用 | 第64-66页 |
| ·let-7a2与VDR表达相关性检测 | 第66-68页 |
| 4.讨论 | 第68-70页 |
| 第二部分 总结 | 第70-71页 |
| 第三部分:let-7a2对肺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第71-82页 |
| 1.材料 | 第71-72页 |
| ·试剂 | 第71-72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| 2.方法 | 第72-75页 |
| ·let-7a2表达质粒(pSilencer4.1-let7a2)的构建及表达活性检测 | 第72-74页 |
| ·靶序列-荧光素酶报道基因活性检测let-7a2对其靶序列的作用 | 第74-75页 |
| ·MTT比色法检测细胞增殖 | 第75页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第75页 |
| 3.结果 | 第75-80页 |
| ·let-7a2表达质粒(pSilencer4.1-let7a2)的酶切鉴定与测序 | 第75-76页 |
| ·let-7a2表达质粒在肺癌A549细胞中的表达 | 第76-77页 |
| ·let-7a2表达质粒对let-7a2靶序列的作用 | 第77-78页 |
| ·let-7a2表达质粒对肺癌A549细胞增殖的影响 | 第78-79页 |
| ·let-7a2表达质粒对肺癌A549细胞周期及凋亡的影响 | 第79-80页 |
| 4.讨论 | 第80-81页 |
| 第三部分 总结 | 第81-82页 |
| 第四部分:未来研究工作的展望 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第87-88页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第88页 |
