| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-17页 |
| 英文缩写注释 | 第17-19页 |
| 前言 | 第19-23页 |
| 第一章 儿童脓毒症和脑膜炎患者血清及脑脊液中HMGB1的改变及临床意义 | 第23-34页 |
| 1 材料与方法 | 第23-26页 |
| ·材料 | 第23-24页 |
| ·抗体 | 第23页 |
| ·其他主要试剂和试剂盒 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·软件 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-26页 |
| ·临床对象及分组 | 第24-25页 |
| ·脓毒症 | 第25页 |
| ·脑膜炎 | 第25页 |
| ·临床标本采集和处理 | 第25页 |
| ·血清 | 第25页 |
| ·脑脊液 | 第25页 |
| ·血清HMGB1检测 | 第25-26页 |
| ·脑脊液HMGB1、Hsp72、Hsp90、αB-crystallin检测 | 第26页 |
| ·统计分析 | 第26页 |
| 2 结果 | 第26-31页 |
| ·脓毒症患儿血清HMGB1含量变化 | 第26-27页 |
| ·脓毒症组和正常对照组血清HMGB1含量比较 | 第26页 |
| ·脓毒症患儿病情前后血清HMGB1含量比较 | 第26-27页 |
| ·脑膜炎患儿脑脊液HMGB1、Hsp72、Hsp90、αB-crystallin含量变化 | 第27-31页 |
| ·病人基本特征 | 第27-28页 |
| ·脑脊液HMGB1、Hsp72、Hsp90、αB-crystallin含量比较 | 第28-30页 |
| ·脑脊液HMGB1、Hsp72、αB-crystallin含量与常规生化指标的相关性分析 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-33页 |
| 4 结论 | 第33-34页 |
| 第二章 氧化应激对HMGB1表达、移位及释放的影响 | 第34-51页 |
| 1 材料与方法 | 第34-40页 |
| ·材料 | 第34-37页 |
| ·细胞系 | 第34页 |
| ·抗体 | 第34-35页 |
| ·其他主要试剂及试剂盒 | 第35-36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·软件 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-40页 |
| ·人外周血单核细胞的分离和培养 | 第37页 |
| ·RAW264.7巨噬细胞培养 | 第37页 |
| ·主要药物配制及处理 | 第37-38页 |
| ·MTT比色法分析细胞存活率 | 第38页 |
| ·细胞核蛋白和胞浆组分的分离 | 第38页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第38-39页 |
| ·细胞培养上清液的浓缩 | 第39页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第39页 |
| ·Western blotting分析 | 第39页 |
| ·免疫荧光分析 | 第39页 |
| ·免疫沉淀分析 | 第39-40页 |
| ·统计分析 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-49页 |
| ·H_2O_2对单核巨噬细胞HMGB1释放的影响 | 第40-42页 |
| ·H_2O_2对单核巨噬细胞HMGB1移位的影响 | 第42-44页 |
| ·H_2O_2对单核巨噬细胞CRM1表达以及与HMGB1相互作用的影响 | 第44-45页 |
| ·H_2O_2对单核巨噬细胞p38,JNK1/2,ERK1/2 MAPK磷酸化的影响 | 第45页 |
| ·MAPK抑制剂对H_2O_2诱导的单核巨噬细胞MAPK磷酸化的影响 | 第45-47页 |
| ·MAPK抑制剂对H_2O_2诱导单核巨噬细胞HMGB1移位和释放的影响 | 第47-49页 |
| 3 讨论 | 第49-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 第三章 Hsp72对HMGB1释放及促炎功能的影响 | 第51-83页 |
| 1 材料与方法 | 第52-60页 |
| ·材料 | 第52-55页 |
| ·细胞系 | 第52页 |
| ·质粒与菌株 | 第52页 |
| ·抗体 | 第52-53页 |
| ·其他主要试剂及试剂盒 | 第53-54页 |
| ·主要仪器 | 第54-55页 |
| ·软件 | 第55页 |
| ·方法 | 第55-60页 |
| ·细胞培养 | 第55-56页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第56页 |
| ·细胞瞬时转染 | 第56页 |
| ·主要药物配制 | 第56-57页 |
| ·乳酸脱氢酶(LDH)释放率检测 | 第57页 |
| ·细胞核蛋白和胞浆组分的分离 | 第57页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第57页 |
| ·细胞培养上清液的浓缩 | 第57-58页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第58页 |
| ·Western blotting分析 | 第58页 |
| ·免疫荧光分析 | 第58页 |
| ·免疫沉淀分析 | 第58-59页 |
| ·酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第59页 |
| ·凝胶电泳迁移率分析(EMSA) | 第59-60页 |
| ·RT-PCR | 第60页 |
| ·热休克模型制作 | 第60页 |
| ·统计分析 | 第60页 |
| 2 结果 | 第60-78页 |
| ·HSR对H_2O_2、LPS、TNF-α诱导的巨噬细胞HMGB1释放的影响 | 第60-62页 |
| ·Hsp72对H_2O_2、LPS、TNF-α诱导的巨噬细胞HMGB1释放的影响 | 第62-64页 |
| ·Hsp72对H_2O_2、LPS、TNF-α诱导的巨噬细胞HMGB1移位的影响 | 第64-66页 |
| ·H_2O_2和HS对巨噬细胞Hsp72亚细胞分布的影响 | 第66-67页 |
| ·H_2O_2、HS、LPS、TNF-α对Hsp72与HMGB1相互作用的影响 | 第67-69页 |
| ·鉴定Hsp72与HMGB1相互作用的结构域 | 第69-71页 |
| ·Hsp72对H_2O_2诱导巨噬细胞组蛋白H3乙酰化及其HDAC1的影响 | 第71-72页 |
| ·Hsp72对LPS、TNF-α、H_2O_2诱导的巨噬细胞CRM1移位及其CRM1与HMGB1相互作用的影响 | 第72-74页 |
| ·Hsp72对HMGB1诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-1β释放的影响 | 第74-75页 |
| ·Hsp72对HMGB1诱导的巨噬细胞MAPK通路活化的影响 | 第75-76页 |
| ·Hsp72对HMGB1诱导的巨噬细胞NF-κB通路活化的影响 | 第76-78页 |
| 3 讨论 | 第78-82页 |
| 4 结论 | 第82-83页 |
| 第四章 槲皮素对HMGB1释放及促炎功能的影响 | 第83-102页 |
| 1 材料与方法 | 第83-90页 |
| ·材料 | 第83-86页 |
| ·动物 | 第83页 |
| ·细胞系 | 第83页 |
| ·抗体 | 第83-84页 |
| ·其他主要试剂及试剂盒 | 第84-85页 |
| ·主要仪器 | 第85-86页 |
| ·软件 | 第86页 |
| ·方法 | 第86-90页 |
| ·动物实验 | 第86页 |
| ·细胞培养 | 第86页 |
| ·主要药物配制 | 第86-87页 |
| ·血清HMGB1检测 | 第87页 |
| ·MTT比色法分析细胞存活率 | 第87页 |
| ·细胞核蛋白和胞浆组分的分离 | 第87页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第87-88页 |
| ·细胞培养上清液的浓缩 | 第88页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第88页 |
| ·Western blotting分析 | 第88页 |
| ·免疫荧光分析 | 第88页 |
| ·酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第88-89页 |
| ·凝胶电泳迁移率分析(EMSA) | 第89页 |
| ·RT-PCR | 第89-90页 |
| ·统计分析 | 第90页 |
| 2 结果 | 第90-100页 |
| ·槲皮素预给药对内毒素血症动物死亡率及其血清TNF-α、HMGB1释放的影响 | 第90-92页 |
| ·槲皮素延迟给药对内毒素血症动物死亡率及其血清HMGB1释放的影响 | 第92-93页 |
| ·槲皮素对LPS、TNF-α诱导的巨噬细胞HMGB1表达、移位、释放的影响 | 第93-95页 |
| ·槲皮素对LPS、HMGB1诱导的巨噬细胞TNF-α、IL-1β释放和表达的影响 | 第95-97页 |
| ·槲皮素对LPS、HMGB1诱导的巨噬细胞MAPK通路活化的影响 | 第97-98页 |
| ·槲皮素对LPS、HMGB1诱导的巨噬细胞NF-κB通路活化的影响 | 第98-100页 |
| 3 讨论 | 第100-101页 |
| 4 结论 | 第101-102页 |
| 总结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-110页 |
| 综述 | 第110-145页 |
| 1 脓毒症及其治疗策略的反思 | 第110-116页 |
| 2 高迁移率族蛋白1与脓毒症 | 第116-138页 |
| 3 内毒素受体及其信号转导 | 第138-145页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第145-149页 |
| 致谢 | 第149页 |
