中文摘要 | 第1-7页 |
英文摘要 | 第7-9页 |
1 前言 | 第9-17页 |
1.1 线虫病研究现状 | 第9页 |
1.2 生物技术在基因检测中的应用 | 第9-14页 |
1.2.1 PCR技术 | 第9-11页 |
1.2.2 RAPD技术 | 第11-12页 |
1.2.3 Southern杂交技术 | 第12页 |
1.2.4 抗线虫基因克隆研究进展 | 第12-14页 |
1.3 甘薯抗病鉴定的现状 | 第14页 |
1.4 作物抗线虫基因定位的研究现状 | 第14-17页 |
2 材料和方法 | 第17-22页 |
2.1 植物材料 | 第17页 |
2.2 方法 | 第17-22页 |
2.2.1 DNA提取方法 | 第18页 |
2.2.1.1 CTAB法 | 第18页 |
2.2.1.2 SDS法 | 第18页 |
2.2.2 引物设计 | 第18-19页 |
2.2.3 PCR扩增和电泳 | 第19页 |
2.2.3.1 PCR反应体系 | 第19页 |
2.2.3.2 反应程序 | 第19页 |
2.2.3.3 结果记录 | 第19页 |
2.2.4 PCR-Southern杂交 | 第19-22页 |
2.2.4.1 转膜 | 第19-20页 |
2.2.4.2 探针制作 | 第20-21页 |
2.2.4.3 杂交 | 第21页 |
2.2.4.4 洗膜 | 第21-22页 |
2.2.4.5 显色 | 第22页 |
3 结果与分析 | 第22-29页 |
3.1 甘薯基因组DNA提取方法的比较 | 第22-23页 |
3.2 PCR特异扩增影响因素分析 | 第23-26页 |
3.2.1 模板DNA浓度的影响 | 第23-24页 |
3.2.2 Taq酶浓度的影响 | 第24页 |
3.2.3 引物浓度的影响 | 第24-25页 |
3.2.4 Mg~(2+)浓度的影响 | 第25页 |
3.2.5 dNTP浓度的影响 | 第25-26页 |
3.3 引物筛选 | 第26-27页 |
3.4 11个经常规鉴定的甘薯品种PCR特异扩增产物的分析 | 第27页 |
3.5 PCR-Southern杂交结果的分析 | 第27-28页 |
3.6 11个未鉴定的甘薯主栽品种PCR特异扩增产物的分析 | 第28-29页 |
4 讨论 | 第29-32页 |
4.1 CTAB法与SDS法的比较 | 第29页 |
4.2 影响PCR反应的几个因素 | 第29-30页 |
4.3 PCR技术对甘薯品种抗线虫病基因检测的可行性 | 第30页 |
4.4 PCR引物的特异性 | 第30页 |
4.5 PCR-Southern杂交结果的验证性 | 第30-31页 |
4.6 评价11份未经常规鉴定的甘薯主栽品种对线虫病的抗性 | 第31-32页 |
参考文献 | 第32-36页 |
附录1 | 第36-37页 |
附录2 | 第37-38页 |
致谢 | 第38页 |