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猪源TTV:分子流行病学,全长序列分析及感染性分子克隆的构建

摘要第1-8页
Abstract第8-20页
第一章 引言第20-38页
   ·TTV 的发现第20-23页
     ·病毒的发现历史和方法第20页
     ·正在出现的病毒第20-21页
     ·TTV 病毒的出现第21页
     ·TTV 天然存在的证据第21页
     ·TTV 的分类过程第21-22页
     ·TTV 的感染性第22-23页
     ·猪源TTV第23页
   ·人TTV 目前的研究现状第23-33页
     ·人TTV 的基因组结构第23-24页
     ·人TTV 的转录第24-25页
     ·人TTV 阅读框分析第25-27页
     ·人TTV 的结构第27-28页
     ·TTV 复制的机制第28页
     ·序列的变异性第28-29页
     ·人TTV 的流行情况和传播方式第29-31页
     ·TTV 的细胞嗜性第31-32页
     ·人TTV 和疾病的关系第32-33页
   ·猪源TTV 目前的研究现状第33-36页
     ·猪源TTV 的分子生物学特征第33-34页
     ·猪源TTV 的分类第34页
     ·猪源TTV 的遗传变异第34-35页
     ·猪源TTV 的流行第35页
     ·猪源 TTV 的传播方式第35-36页
     ·猪源TTV 的致病性第36页
   ·反向遗传学第36-37页
   ·目的意义第37-38页
第二章 猪源 TTV1、TTV2 与 PCV2 的流行病学调查第38-50页
   ·材料与方法第39-42页
     ·样品采集第39页
     ·菌株、质粒与试剂第39页
     ·病料的处理第39-40页
     ·病毒DNA 的提取第40页
     ·检测引物的设计第40-41页
     ·TTV1,TTV2 和PCV2 的检测第41页
     ·TTV1 和TTV2 部分UTR 基因的扩增第41页
     ·TTV1 和TTV2 部分UTR 基因的克隆第41-42页
     ·序列测定第42页
     ·序列分析第42页
   ·结果第42-48页
     ·采集样品的TTV 的PCR 检测结果第42-43页
     ·采集样品的 PCV2 的 PCR 检测结果第43-44页
     ·TTV1 和TTV2 部分UTR 基因序列分析第44页
     ·采集样品TTV 检测结果统计分析第44-48页
   ·讨论第48-50页
第三章 猪源TTV1、TTV2 的全长序列分析第50-67页
   ·材料与方法第50-54页
     ·样品第50页
     ·DNA 的提取第50-51页
     ·TTV1 与TTV2 全长基因组的扩增,克隆和测序第51页
     ·序列分析第51页
     ·甲基化分析实验第51-54页
   ·结果第54-64页
     ·TTV1 和TTV2 分段扩增的结果第54页
     ·测序结果第54-55页
     ·猪源 TTV 的基本结构分析第55页
     ·猪源 TTV 的阅读框分析第55-56页
     ·TTV1,2 的全长基因组的变异性分析第56-57页
     ·TTV1,2 的全长核苷酸比对和阅读框的氨基酸比对第57-60页
     ·TTV1 和 TTV2 的碱基变异率分析第60-62页
     ·猪源 TTV 的 GpG 在线查找和甲基化分析第62-63页
     ·FJ/2010/China/TTV2/2 难测区和高 GC 区的二级结构预测第63-64页
     ·TTV 全长进化树分析第64页
   ·讨论第64-67页
第四章 猪源TTV2 蛋白表达,抗体制作及细胞定位第67-81页
   ·材料第67-68页
     ·毒株、血清、菌株与载体第67页
     ·试剂第67页
     ·实验动物第67-68页
   ·方法第68-74页
     ·TTV2 中主要阅读框的预测第68页
     ·TTV2 ORF1 的抗原性分析第68页
     ·引物设计与合成第68-69页
     ·原核重组表达质粒的构建和鉴定第69-70页
     ·重组菌的诱导表达和纯化第70-72页
     ·表达产物的SDS-PAGE 分析第72页
     ·ORF1a,ORF2 蛋白抗血清的制备第72-73页
     ·真核重组表达质粒的构建和鉴定第73-74页
     ·真核质粒转染后的间接免疫荧光第74页
   ·结果第74-79页
     ·ORF1,ORF1a,ORF2,ORF3 基因的获得第74-75页
     ·原核重组质粒的鉴定第75-76页
     ·重组蛋白ORF1a 和ORF2 的表达和纯化第76页
     ·重组蛋白ORF1a, ORF2 的多抗血清的ELISA 效价测定第76页
     ·真核重组质粒的鉴定第76-77页
     ·真核质粒转染细胞后的间接免疫荧光第77-79页
     ·讨论第79-81页
第五章 猪源TTV2 感染性克隆的构建和鉴定第81-96页
   ·材料与方法第82-90页
     ·病毒和细胞第82页
     ·试验试剂和主要仪器设备第82页
     ·TTV1.0,1.3,2.0 个全长质粒的构建第82-87页
     ·TTV2 转录的研究第87-89页
     ·TTV2 复制的研究第89-90页
   ·结果第90-94页
     ·TTV2 FJ/China/2010/TTV/2 的各片段的PCR 扩增结果第90-91页
     ·TTV2 1.0,1.3,2.0 个全长的鉴定第91-92页
     ·Northern Bot 杂交的结果第92-93页
     ·Southern Blot 杂交结果第93-94页
     ·间接免疫荧光的结果第94页
   ·讨论第94-96页
第六章 全文结论第96-97页
参考文献第97-107页
附录第107-117页
致谢第117-118页
作者简介第118页

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