| 中文摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-22页 |
| 1.花生黄曲霉病及其研究 | 第14-22页 |
| ·黄曲霉和黄曲霉毒素 | 第14-15页 |
| ·黄曲霉对花生的侵染及黄曲霉毒素污染的控制 | 第15-17页 |
| ·黄曲霉对花生的侵染 | 第15-16页 |
| ·黄曲霉毒素污染的控制 | 第16-17页 |
| ·花生对黄曲霉侵染的抗性机制研究 | 第17-18页 |
| ·花生种子本身固有的抗性因素 | 第17页 |
| ·花生对黄曲霉的诱导型抗性机制 | 第17-18页 |
| ·花生抗黄曲霉的研究进展 | 第18-19页 |
| ·花生抗黄曲霉育种的研究进展 | 第18页 |
| ·基因工程手段在花生抗黄曲霉上的应用 | 第18-19页 |
| ·胰蛋白酶抑制剂及其在植物抗病上的应用 | 第19-20页 |
| ·蛋白酶抑制剂的特征及分类 | 第19页 |
| ·蛋白酶抑制剂的抗病作用 | 第19-20页 |
| ·COMT基因和MYB、TTG2基因的结构功能概述 | 第20页 |
| ·本研究的目的和主要内容 | 第20-22页 |
| 第二章:花生胰蛋白酶抑制剂基因的原核表达及体外抑制黄曲霉活性检测 | 第22-40页 |
| 1.材料与方法 | 第22-32页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22-23页 |
| ·本实验所采用的菌株和质粒载体 | 第23页 |
| ·本实验所使用的试剂盒 | 第23页 |
| ·本实验所用到的工具酶和其它生化试剂 | 第23页 |
| ·试验所用主要仪器 | 第23页 |
| ·本实验所用到的引物 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-32页 |
| ·大肠杆菌表达载体的构建 | 第24-28页 |
| ·目的基因的诱导表达 | 第28页 |
| ·表达产物的检测 | 第28-31页 |
| ·粗提物黄曲霉菌的抑菌试验 | 第31-32页 |
| 2.结果与分析 | 第32-38页 |
| ·PTI基因原核表达载体构建 | 第32-36页 |
| ·PTI基因和pGEX-4T-1的提取结果 | 第32页 |
| ·双酶切后获得的PTI基因和表达载体 | 第32-33页 |
| ·pGEX4T-1-PTI载体转化DH5α的鉴定 | 第33-34页 |
| ·PGEX4T-1-PTI载体转化表达载体BL21的鉴定 | 第34页 |
| ·PTI基因的核苷酸序列分析 | 第34-36页 |
| ·PTI基因的原核表达 | 第36-38页 |
| ·PTI基因原核表达 | 第36-37页 |
| ·PTI对黄曲霉菌的抗性鉴定 | 第37-38页 |
| 3.小结与讨论 | 第38-40页 |
| ·产物拖带现象的PCR问题的解决 | 第38页 |
| ·原核表达蛋白的提取与活性的关系 | 第38-39页 |
| ·花生胰蛋白酶抑制剂可用于提高花生抗黄曲霉性 | 第39-40页 |
| 第三章:木质素代谢相关基因COMT扩增、表达载体构建遗传转化 | 第40-53页 |
| 1 材料与方法 | 第40-44页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·植物材料 | 第40页 |
| ·本实验所采用的菌株和质粒载体 | 第40-41页 |
| ·本实验所使用的试剂盒 | 第41页 |
| ·本实验所用到的工具酶和其它生化试剂 | 第41页 |
| ·本实验所用引物 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·目的基因的扩增和回收 | 第41-42页 |
| ·PSC1300-COMT载体的构建 | 第42-43页 |
| ·测序及序列分析 | 第43-44页 |
| 2.植物表达载体转化拟南芥 | 第44-46页 |
| ·液氮冻融法制备农杆菌感受态细胞 | 第44页 |
| ·植物表达载体转化农杆菌 | 第44页 |
| ·农杆菌质粒提取及阳性克隆鉴定 | 第44-45页 |
| ·农杆菌侵染拟南芥 | 第45页 |
| ·拟南芥的种植 | 第45页 |
| ·工程菌液的制备 | 第45页 |
| ·转化程序 | 第45页 |
| ·转基因种子的筛选 | 第45-46页 |
| ·种子的处理和准备 | 第45页 |
| ·转化平板的制备 | 第45-46页 |
| 3 结果分析 | 第46-53页 |
| ·目的基因的扩增和回收 | 第46页 |
| ·植物表达载体构建 | 第46-50页 |
| ·植物表达载体的双酶切回收 | 第46-47页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第47页 |
| ·PSC-comt的菌落PCR和双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·COMT基因的核苷酸序列分析 | 第48-50页 |
| ·拟南芥转化 | 第50-51页 |
| ·拟南芥果夹修剪后,侵染转化前图片 | 第50-51页 |
| ·侵染一周后图片 | 第51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·引物设计与载体构建 | 第51-52页 |
| ·本研究中存在的一些问题 | 第52-53页 |
| 第四章 种皮结构转录因子MYB和TTG2基因的扩增、表达载体构建和转化花生 | 第53-76页 |
| 1.材料与方法 | 第54-58页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·植物材料 | 第54页 |
| ·本实验所采用的菌株和质粒载体 | 第54页 |
| ·本实验所使用的试剂盒 | 第54页 |
| ·本实验所用到的工具酶和其它生化试剂 | 第54页 |
| ·本实验所用引物 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·目的基因的扩增和回收 | 第54-55页 |
| ·PCR产物的回收 | 第55页 |
| ·MYB和TTG2基因植物表达载体的构建 | 第55-58页 |
| ·测序及序列分析 | 第58页 |
| 2.植物表达载体转化拟南芥 | 第58页 |
| 3 结果分析 | 第58-72页 |
| ·MYB和TTG2基因的扩增和回收 | 第58-59页 |
| ·植物表达载体构建 | 第59-61页 |
| ·植物表达载体的双酶切回收 | 第59页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第59页 |
| ·PSC-MYB和PSC-TTG2的菌落PCR和双酶切鉴定 | 第59-61页 |
| ·MYB和TTG2基因的核苷酸序列分析 | 第61-68页 |
| ·MYB基因的核苷酸序列分析 | 第61-64页 |
| ·TTG2基因的核苷酸序列分析 | 第64-68页 |
| ·TTG2测序结果在NCBI中的Blast结果 | 第64-65页 |
| ·TTG2测序拼接结果 | 第65-68页 |
| ·TTG2基因所编码蛋白的翻译结果 | 第68页 |
| ·测序峰图 | 第68页 |
| ·拟南芥转化 | 第68页 |
| ·讨论与展望 | 第68-72页 |
| ·花生果、种皮的结构特点与抗黄曲霉的关系 | 第68-69页 |
| ·关于本研究中存在的一些问题 | 第69页 |
| ·植物转基因过程中出现的一些问题的探讨 | 第69-71页 |
| ·后续研究及本研究的展望 | 第71-72页 |
| 5.参考文献 | 第72-76页 |
| 附录一:实验用溶液及培养基的配制 | 第76-77页 |
| 附录二:本试验所用DNA Marker | 第77-78页 |
| 附录三:本试验所用质粒载体 | 第78-80页 |
| 附录四:相关载体的测序峰图 | 第80-87页 |
| ·PTI载体的测序峰图 | 第80-81页 |
| ·COMT载体的测序峰图 | 第81-83页 |
| ·MYB载体的测序峰图 | 第83-85页 |
| ·TTG2载体的测序峰图 | 第85-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
