| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表(ABBREVIATION) | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第13-24页 |
| ·问题的提出 | 第13-14页 |
| ·草莓离体再生研究进展 | 第14-21页 |
| ·基本培养基 | 第15页 |
| ·外植体 | 第15-19页 |
| ·基因型 | 第15页 |
| ·外植体类型 | 第15-19页 |
| ·生理状态 | 第19页 |
| ·接种方式及切割处理 | 第19页 |
| ·激素与添加物 | 第19-20页 |
| ·激素 | 第19-20页 |
| ·附加物 | 第20页 |
| ·培养条件 | 第20-21页 |
| ·草莓遗传转化研究进展 | 第21-23页 |
| ·外植体对转化效率的影响 | 第21页 |
| ·基因型对转化效率的影响 | 第21页 |
| ·叶龄对转化效率的影响 | 第21页 |
| ·预培养时间对转化效率的影响 | 第21页 |
| ·农杆菌侵染对转化效率的影响 | 第21-23页 |
| ·工程菌液的浓度 | 第21-22页 |
| ·工程菌液侵染的时间 | 第22页 |
| ·AS对转化效率的影响 | 第22页 |
| ·共培养对转化效率的影响 | 第22-23页 |
| ·延迟培养与选择性培养 | 第23页 |
| ·FLOWER LOCUS T(FT)基因研究进展 | 第23-24页 |
| ·研究的目的和内容 | 第24页 |
| ·研究目的 | 第24页 |
| ·研究内容 | 第24页 |
| 2 草莓花药再生体系的摸索 | 第24-33页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·方法 | 第25-27页 |
| ·小孢子发育时期的确定 | 第25-26页 |
| ·临时切片的制作 | 第25页 |
| ·花药石蜡切片的制作 | 第25-26页 |
| ·花药的接种与培养 | 第26-27页 |
| ·培养基配方 | 第26页 |
| ·花药接种步骤 | 第26页 |
| ·花药培养条件 | 第26-27页 |
| ·数据调查与统计 | 第27页 |
| ·再生植株倍性鉴定 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-33页 |
| ·愈伤组织分化和绿苗的产生 | 第27页 |
| ·培养基中不同激素浓度对愈伤组织诱导率和绿苗分化率的影响 | 第27-29页 |
| ·草莓花粉不同发育时期对诱导愈伤组织的影响 | 第29-32页 |
| ·花药再生植株的倍性的鉴定 | 第32页 |
| ·单倍体成苗率的统计 | 第32-33页 |
| 3 草莓叶片再生体系的建立 | 第33-39页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·草莓无菌试管苗材料的准备 | 第34页 |
| ·接种方法 | 第34页 |
| ·试验处理 | 第34-35页 |
| ·不同基本培养基对叶片再生不定芽的影响 | 第34页 |
| ·不同暗培养时间对叶片再生不定芽的影响 | 第34页 |
| ·数据统计 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-39页 |
| ·不同激素组合对草莓不定芽分化的影响 | 第35-37页 |
| ·暗处理对草莓不定芽分化的影响 | 第37-39页 |
| 4 PCFT基因表达载体的构建 | 第39-45页 |
| ·材料 | 第39-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第39页 |
| ·酶及生化试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·pBI121-PcFT植物表达载体构建流程图 | 第40页 |
| ·pBI121-PcFT植物表达载体示意图 | 第40-41页 |
| ·小量提取质粒DNA | 第41页 |
| ·目的条带的回收纯化 | 第41页 |
| ·TA克隆 | 第41-43页 |
| ·反应体系 | 第41-42页 |
| ·TA克隆引物 | 第42页 |
| ·酶切 | 第42页 |
| ·连接 | 第42页 |
| ·CaCl_2法制备感受态 | 第42-43页 |
| ·转化 | 第43页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-45页 |
| ·pBI121-PcFT植物表达载体的酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·目的基因的序列测定 | 第45页 |
| 5 根癌农杆菌介导法转化草莓 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·培养基 | 第45-46页 |
| ·抗生素 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-49页 |
| ·选择培养中Km选择压的确定 | 第46页 |
| ·选择培养中抑菌抗生素及浓度的确定 | 第46页 |
| ·农杆菌叶盘法的转化程序 | 第46-47页 |
| ·菌液的制备: | 第46-47页 |
| ·受体材料的预培养 | 第47页 |
| ·农杆菌侵染 | 第47页 |
| ·受体材料的共培养、选择培养、继代培养 | 第47页 |
| ·转化因子的筛选 | 第47-48页 |
| ·菌液浓度 | 第47页 |
| ·侵染时间 | 第47页 |
| ·预培养时间 | 第47页 |
| ·共培养时间 | 第47-48页 |
| ·选择方式 | 第48页 |
| ·抗性芽的增殖、生根 | 第48页 |
| ·GUS染色瞬间表达鉴定 | 第48页 |
| ·GUS染色瞬间表达鉴定步骤 | 第48页 |
| ·GUS检测液配制 | 第48页 |
| ·评价指标 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·培养基中Km选择压的确定 | 第49-50页 |
| ·Cef抑菌浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·转化因子的筛选 | 第51-54页 |
| ·菌液浓度对GUS瞬时表达率的影响 | 第51页 |
| ·菌液侵染时间对GUS瞬时表达率的影响 | 第51-52页 |
| ·预培养时间对转化率的影响 | 第52页 |
| ·共培养时间对转化率的影响 | 第52-53页 |
| ·筛选方式对转化率的影响 | 第53-54页 |
| 6 转基因草莓的分子生物学鉴定 | 第54-56页 |
| ·方法 | 第54页 |
| ·PCR引物 | 第54页 |
| ·PCR扩增体系 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-56页 |
| ·转化植株的获得 | 第54-55页 |
| ·转化阳性苗PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 7 讨论 | 第56-61页 |
| ·草莓花药再生体系的摸索 | 第56-57页 |
| ·生长调节物质和暗处理对叶片再生频率的影响 | 第57-58页 |
| ·生长调节物质 | 第57页 |
| ·暗处理 | 第57-58页 |
| ·根癌农杆菌介导的草莓转化 | 第58-61页 |
| ·要选择合适的Km选择压和Cef抑菌浓度 | 第58页 |
| ·关于转化体的筛选方法 | 第58-59页 |
| ·GUS报告基因的瞬间表达对判断菌液侵染时间和最合适侵染浓度的借鉴作用 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
