| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一部分 绪论 | 第9-28页 |
| 一 哺乳动物性别决定研究的历史回顾 | 第9-17页 |
| 1 睾丸决定因子-TDF假说 | 第9-11页 |
| 2 SRY/Sry基因及其表达蛋白的研究概况 | 第11-14页 |
| 3 性别决定的分子机制 | 第14-17页 |
| 二 哺乳动物性别控制方法的应用现状 | 第17-18页 |
| 三 核酸疫苗的发展历史 | 第18-28页 |
| 1 核酸免疫的研究历程 | 第18-19页 |
| 2 核酸免疫的免疫应答机理 | 第19-21页 |
| 3 核酸疫苗研制的技术路线 | 第21-22页 |
| 4 核酸免疫的接种途径和剂量 | 第22-24页 |
| 5 增强核酸疫苗效力的途径 | 第24-26页 |
| 6 核酸疫苗的优势 | 第26页 |
| 7 核酸疫苗的安全性 | 第26-28页 |
| 第二部分 本题的研究内容和意义 | 第28-30页 |
| 一 本题的立题依据 | 第28页 |
| 二 本题的实验思路 | 第28-29页 |
| 1 制备核酸疫苗并免疫实验动物 | 第28页 |
| 2 检测仔鼠 | 第28-29页 |
| 3 统计学分析 | 第29页 |
| 三 本题的研究目的及意义 | 第29-30页 |
| 第三部分 实验材料和方法 | 第30-44页 |
| 一 实验材料 | 第30页 |
| 1 实验动物 | 第30页 |
| 2 菌株及质粒 | 第30页 |
| 3 酶、试剂盒及各种化学试剂 | 第30页 |
| 二 实验过程 | 第30-43页 |
| 1 鉴定pCR3.1-Sry重组质粒的活性状态 | 第30-32页 |
| 2 制备核酸疫苗 | 第32-34页 |
| 3 免疫动物并进行动物交配 | 第34-36页 |
| 4 检测仔鼠 | 第36-43页 |
| 三 统计分析 | 第43-44页 |
| 第四部分 结果和分析 | 第44-51页 |
| 一 重组质粒的状态及准确性 | 第44页 |
| 二 核酸疫苗的制备及质量控制 | 第44-45页 |
| 三 母鼠及其子代小鼠的统计结果 | 第45-47页 |
| 1 肌肉注射组统计结果 | 第45-46页 |
| 2 基因枪注射组统计结果 | 第46-47页 |
| 四 仔鼠的检测结果 | 第47-50页 |
| 1 PCR法检测仔鼠的基因型 | 第47-48页 |
| 2 Southern blotting进一步验证PCR阳性仔鼠的基因型 | 第48-50页 |
| 3 性反转仔鼠表型与正常雌鼠无显著差别 | 第50页 |
| 五 核酸疫苗免疫效率的计算 | 第50-51页 |
| 第五部分 讨论和结论 | 第51-56页 |
| 一 核酸疫苗质量的控制 | 第51页 |
| 1 质粒的状态及准确性验证 | 第51页 |
| 2 核酸疫苗浓度和纯度的控制 | 第51页 |
| 3 质粒在真核细胞中表达的有效性 | 第51页 |
| 二 免疫方法和免疫剂量的实施 | 第51-52页 |
| 三 两种免疫方式的母鼠产仔率、产仔量及仔鼠性比的比较分析 | 第52页 |
| 四 仔鼠基因型的检测过程分析 | 第52-54页 |
| 1 模板DNA纯度和浓度的要求 | 第52-53页 |
| 2 PCR反应体系 | 第53-54页 |
| 五 免疫效率低的原因分析 | 第54-55页 |
| 六 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-72页 |
| 附录一 溶液配制 | 第62-65页 |
| 附录二 重组质粒中Sry基因片段的测序结果 | 第65-68页 |
| 附录三 免疫孕鼠产仔的原始数据 | 第68-72页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |