| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-40页 |
| ·双链RNA病毒 | 第14-19页 |
| ·双链RNA病毒的分类 | 第15-16页 |
| ·dsRNA病毒的复制、翻译和组装 | 第16-19页 |
| ·L-A的复制 | 第16-17页 |
| ·翻译 | 第17-18页 |
| ·病毒颗粒的包装 | 第18-19页 |
| ·双链RNA病毒对其宿主的影响 | 第19-21页 |
| ·导致宿主发生疾病或病害 | 第19-20页 |
| ·降低宿主的致病力 | 第20页 |
| ·分泌毒素 | 第20页 |
| ·影响植物对环境的适应能力 | 第20-21页 |
| ·几种重要植物病原菌中的DSRNA病毒 | 第21-25页 |
| ·低毒病毒 | 第21-22页 |
| ·荷兰榆树病致病菌中的dsRNA病毒 | 第22-23页 |
| ·立枯丝核菌中的dsRNA病毒 | 第23-24页 |
| ·燕麦疫病菌的病毒 | 第24-25页 |
| ·其他物种中的双链RNA病毒 | 第25页 |
| ·细菌中的dsRNA病毒 | 第25页 |
| ·昆虫及原生动物中的dsRNA病毒 | 第25页 |
| ·双链RNA病毒与单链(+)RNA的关系 | 第25-26页 |
| ·低毒病毒的研究进展 | 第26-36页 |
| ·低毒病毒的发现 | 第26页 |
| ·低毒病毒的遗传结构 | 第26-28页 |
| ·低毒病毒对板栗疫病菌影响的分子机制 | 第28-35页 |
| ·低毒病毒对板栗疫病菌信号传导途径的影响 | 第28-33页 |
| ·低毒病毒对板栗疫病菌转录组的影响 | 第33-35页 |
| ·低毒病毒对板栗疫病菌蛋白组的影响 | 第35页 |
| ·低毒病毒功能基因组学研究进展 | 第35-36页 |
| ·低毒病毒与马铃薯Y病毒在基因组结构上的相似性 | 第36-39页 |
| ·马铃薯Y病毒的遗传结构和蛋白功能 | 第37-39页 |
| ·低毒病毒 | 第39页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第39-40页 |
| 第二章 材料与方法 | 第40-63页 |
| ·菌种 | 第40-41页 |
| ·细菌及真菌菌种 | 第40页 |
| ·菌种保存 | 第40-41页 |
| ·培养基及培养条件 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌 | 第41页 |
| ·板栗疫病菌 | 第41-42页 |
| ·抗生素、常用生化试剂及其使用浓度 | 第42页 |
| ·载体 | 第42-44页 |
| ·本研究中用到的质粒载体 | 第42-43页 |
| ·PCR产物克隆载体的制备 | 第43-44页 |
| ·T载体的制备 | 第43页 |
| ·平端PCR产物克隆载体的制备 | 第43-44页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·引物设计 | 第44页 |
| ·反应条件以及反应体系的设置 | 第44页 |
| ·重组质粒的构建及筛选 | 第44-48页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第44页 |
| ·DNA酶切 | 第44-45页 |
| ·DNA片段的回收 | 第45页 |
| ·连接反应 | 第45-46页 |
| ·转化 | 第46页 |
| ·感受态的制备 | 第46页 |
| ·转化方法 | 第46页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第46-48页 |
| ·重组质粒的鉴别 | 第46-47页 |
| ·质粒快速提取和酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·低毒病毒DSRNA的分析 | 第48-50页 |
| ·低毒病毒dsRNA的提取和纯化 | 第48页 |
| ·低毒病毒dsRNA累积量的分析 | 第48-50页 |
| ·低毒病毒累积量的定量PCR检测 | 第49-50页 |
| ·病毒dsRNA的半定量分析 | 第50页 |
| ·板栗疫病菌的转化和转染 | 第50-54页 |
| ·原生质体的制备 | 第50-51页 |
| ·原生质体再生 | 第51-52页 |
| ·原生质体转化 | 第52-53页 |
| ·质粒DNA的准备 | 第52页 |
| ·转化 | 第52页 |
| ·转化株的纯化 | 第52-53页 |
| ·板栗疫病菌的转染 | 第53-54页 |
| ·RNA的体外合成 | 第53页 |
| ·转染 | 第53-54页 |
| ·低毒病毒通过分生孢子传播效率的检测 | 第54页 |
| ·板栗疫病菌总DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·用于PCR检测的微量DNA提取 | 第54页 |
| ·大量总DNA的提取 | 第54-55页 |
| ·SOUTHERN杂交分析 | 第55-56页 |
| ·总DNA酶切 | 第55页 |
| ·转膜 | 第55-56页 |
| ·预杂交和探针标记 | 第56页 |
| ·洗膜 | 第56页 |
| ·病毒蛋白的表达、纯化及抗体制备 | 第56-60页 |
| ·病毒蛋白的原核表达 | 第56-57页 |
| ·蛋白SDS-PAGE检测 | 第57-58页 |
| ·包涵体的纯化 | 第58-59页 |
| ·包涵体的复性 | 第59页 |
| ·抗体制备及效价检测 | 第59-60页 |
| ·板栗疫病菌总蛋白和VESICLE的提取 | 第60-61页 |
| ·板栗疫病菌总蛋白的提取 | 第60-61页 |
| ·板栗疫病菌vesicle的提取 | 第61页 |
| ·WESTERN杂交检测板栗疫病菌总蛋白中的病毒蛋白 | 第61页 |
| ·病毒蛋白相互作用分析 | 第61-63页 |
| ·配体的偶联 | 第62页 |
| ·再生条件的确定 | 第62页 |
| ·与配体相互作用的分析 | 第62-63页 |
| 第三章 结果与分析 | 第63-98页 |
| ·低毒病毒累积量与真菌宿主菌株的关系 | 第63-68页 |
| ·CHV1-EP713,CHV1-Euro7和CHV1-EP721的基因组序列比对分析 | 第63-65页 |
| ·CHV1-EP713,CHV1-Euro7和CHV1-EP721在同一宿主EP721(-v)中病毒累积量的相对定量分析 | 第65-66页 |
| ·低毒病毒株系对不同宿主表型的影响以及在不同宿主中的病毒累积量 | 第66-68页 |
| ·CHV1-EP721和CHV1-EURO7、CHV1-EP713之间嵌合病毒的构建 | 第68-76页 |
| ·嵌合病毒721A/E7B和E7A/721B的构建 | 第68-72页 |
| ·构建策略 | 第68-69页 |
| ·嵌合病毒721A/E7B和E7A/721B重组质粒的获得 | 第69-71页 |
| ·嵌合病毒721A/E7B和E7A/721B转染株的获得 | 第71-72页 |
| ·嵌合病毒721A/713B和713A/721B的构建 | 第72-76页 |
| ·构建策略 | 第72-74页 |
| ·嵌合病毒721A/713B和713A/721B重组质粒的获得 | 第74-75页 |
| ·嵌合病毒721A/713B和713A/721B转染株的获得 | 第75-76页 |
| ·嵌合病毒721A/E7B、E7A/721B、721A/713B和713A/721B转染株中病毒DSRNA累积量的定量 | 第76-77页 |
| ·分生孢子传毒效率与病毒累积量的关系 | 第77-78页 |
| ·进一步构建嵌合病毒,定位影响低毒病毒累积量的病毒基因 | 第78-86页 |
| ·CHV1-EP721和CHV1-Euro7之间ORF B嵌合病毒重组质粒的构建 | 第78-82页 |
| ·嵌合病毒721/E7 NarI和E7/721 NarI的构建以及鉴定 | 第78-80页 |
| ·嵌合病毒721/E7 PH和E7/721 PH cDNA重组质粒的构建以及鉴定 | 第80-82页 |
| ·嵌合病毒721/E7(5.3-7.8 k)和E7/721(5.3-7.8k)cDNA重组质粒的构建及鉴定 | 第82页 |
| ·嵌合病毒的RT-PCR验证 | 第82-84页 |
| ·CHV1-EP721和CHV1-Euro7之间ORF B嵌合病毒转染株中病毒dsRNA累积量的半定量分析 | 第84-86页 |
| ·影响低毒病毒累积量的病毒基因的反式互补作用 | 第86-91页 |
| ·质粒的构建 | 第86-88页 |
| ·转化株的获得以及转化株中病毒dsRNA累积量的检测 | 第88页 |
| ·转化株的纯化及鉴定 | 第88-89页 |
| ·GFP的融合不影响5.3-7.8 kb片段的反式互补作用 | 第89-90页 |
| ·影响低毒病毒累积量的病毒基因的精细定位 | 第90-91页 |
| ·CHV1-EP721的6.4-7.0 KB片段内氨基酸的点突变 | 第91-94页 |
| ·点突变CHV1-EP721全长cDNA克隆的构建 | 第91-93页 |
| ·CHV1-EP721的6.4-7.0 kb片段点突变的质粒的构建 | 第93-94页 |
| ·低毒病毒CHV1-EURO7的6.1-6.8 KB片段的原核表达 | 第94-95页 |
| ·BIACORE检测低毒病毒CHV1-EUR07的6.1-6.8 KB片段原核表达产物P4与其他病毒蛋白的相互作用 | 第95-98页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第98-104页 |
| ·影响低毒病毒累积量的因素在于病毒本身 | 第98页 |
| ·影响低毒病毒CHV1-EP721病毒DSRNA累积量的病毒基因定位于ORF B的5.3-7.8 KB区域 | 第98-99页 |
| ·低毒病毒通过分生孢子的传播效率与病毒累积量成正相关 | 第99-100页 |
| ·影响低毒病毒累积量的病毒基因的编码产物能够反式促进病毒在宿主中的累积水平 | 第100-101页 |
| ·CHV1-EP721 ORF B的6.4-7.0 KB区域中四个氨基酸的定点突变降低了该区域编码产物的反式作用能力 | 第101-102页 |
| ·CHV1-EURO7 ORFB的6.4-7.0 KB区域编码产物成熟加工形式及其与其他病毒蛋白的相互作用的研究 | 第102页 |
| ·问题与展望 | 第102-103页 |
| ·本研究的创新点 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-115页 |
| 致谢 | 第115-116页 |
| 攻读博士学位期间所发表的论文和取得的研究成果 | 第116页 |
