细菌的Sir2蛋白研究
| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-27页 |
| ·Sir2蛋白的分类及分布 | 第12页 |
| ·Sir2的作用机制 | 第12-16页 |
| ·Sir2的功能 | 第16-20页 |
| ·染色质沉默 | 第16-18页 |
| ·长寿与衰老 | 第18-19页 |
| ·Sir2在DNA损伤修复中的作用 | 第19页 |
| ·Sir2在细胞代谢中的作用 | 第19-20页 |
| ·真核细胞中的作用 | 第19-20页 |
| ·原核生物中Sir2蛋白的功能 | 第20页 |
| ·Sir2的影响因子 | 第20-22页 |
| ·抑制因子 | 第20-21页 |
| ·激活因子 | 第21-22页 |
| ·Sir2的蛋白质结构 | 第22-23页 |
| ·Sir2在NAD的代谢途径中的作用 | 第23-25页 |
| ·研究Sir2蛋白的意义 | 第25-26页 |
| ·研究原核生物中Sir2蛋白的生物学意 | 第25页 |
| ·研究Sir2蛋白对结核病治疗的意义 | 第25-26页 |
| ·本课题的研究目的与计划 | 第26-27页 |
| 第二章 大肠杆菌CobB的研究 | 第27-53页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·材料与方法 | 第27-37页 |
| ·试验材料 | 第27-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第27-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·溶液及缓冲液 | 第29-31页 |
| ·实验仪器 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-37页 |
| ·大肠杆菌K12基因组的提取 | 第31页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第31页 |
| ·利用PCR扩增大肠杆菌cobB基因 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌cobB基因表达载体的构建 | 第32页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第32-33页 |
| Ⅰ、感受态细胞的制备(CaCl2法) | 第32-33页 |
| Ⅱ、大肠杆菌的转化 | 第33页 |
| ·重组质粒的筛选、验证 | 第33页 |
| ·重组CobB蛋白的诱导表达 | 第33页 |
| ·重组CobB蛋白的大量表达与纯化 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度及分子量 | 第34-35页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第35页 |
| ·CobB活性的测定 | 第35-36页 |
| Ⅰ、依赖于NAD~+的去乙酰化酶活性 | 第35页 |
| Ⅱ、ADP—核糖转移酶活性 | 第35-36页 |
| Ⅲ、抑制物试验 | 第36页 |
| ·cobB缺失突变菌株W3110试验 | 第36-37页 |
| Ⅰ、酸激试验 | 第36页 |
| Ⅱ、热激试验 | 第36页 |
| Ⅲ、吡嗪酰胺和烟酰胺耐受试验 | 第36页 |
| Ⅳ、饥饿耐受试验 | 第36-37页 |
| ·CobB超量表达试验 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-50页 |
| ·大肠杆菌cobB从基因组的克隆 | 第37页 |
| ·大肠杆菌cobB表达载体的构建与验证 | 第37-39页 |
| ·大肠杆菌CobB蛋白的表达与纯化 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌CobB的活性鉴定 | 第40-44页 |
| ·去乙酰化酶活性测定 | 第40页 |
| ·最适合反应温度和pH值 | 第40-41页 |
| ·抑制物对酶活的影响 | 第41-43页 |
| ·ADP—核糖转移酶活性 | 第43-44页 |
| ·cobB缺失突变菌株W3110试验 | 第44-47页 |
| ·热激试验 | 第44-45页 |
| ·酸激试验 | 第45-46页 |
| ·吡嗪酰胺和烟酰胺耐受试验 | 第46-47页 |
| ·饥饿耐受试验 | 第47页 |
| ·CobB的超量表达对菌体形态的影响 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| 第三章 结核分枝杆菌Sir2的体外酶活性研究 | 第53-64页 |
| ·前言 | 第53-54页 |
| ·材料与方法 | 第54-56页 |
| ·试验材料 | 第54-56页 |
| ·结核分枝杆菌基因组的提取 | 第54-55页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第55页 |
| ·PCR扩增结核分枝杆菌sir2基因 | 第55页 |
| ·结核分枝杆菌sir2基因表达载体的构建 | 第55-56页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第56页 |
| ·重组质粒的筛选、验证 | 第56页 |
| ·蛋白质的诱导生成 | 第56页 |
| ·蛋白质的大量表达与纯化 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE分析蛋白纯度及分子量 | 第56页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第56页 |
| ·Sir2活性的测定 | 第56页 |
| Ⅰ、依赖于NAD~+的去乙酰化酶活性 | 第56页 |
| Ⅱ、ADP—核糖转移酶活性 | 第56页 |
| Ⅲ、抑制物试验 | 第56页 |
| ·结果与分析 | 第56-63页 |
| ·从基因组克隆结核分枝杆菌sir2基因 | 第56-57页 |
| ·结核分枝杆菌sir2表达载体的构建与验证 | 第57-58页 |
| ·结核分枝杆菌Sir2蛋白的表达与纯化 | 第58-59页 |
| ·结核分枝杆菌Sir2的活性鉴定 | 第59-63页 |
| ·依赖于NAD~+的去乙酰化酶活性 | 第59页 |
| ·最适反应温度和pH值 | 第59-60页 |
| ·抑制物对酶活的影响 | 第60-62页 |
| ·ADP—核糖转移酶活性 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-74页 |
| 发表文章目录 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
