缩略语表 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-9页 |
Abstract | 第9-11页 |
第一章 文献综述 | 第11-25页 |
1 蓝藻概述 | 第11页 |
2 集胞藻PCC6803概述 | 第11-15页 |
·集胞藻6803的基因组 | 第11-12页 |
·集胞藻6803的转录组学研究 | 第12页 |
·集胞藻6803的蛋白组学研究 | 第12-13页 |
·集胞藻6803的遗传操作 | 第13-15页 |
·转化和接合转移 | 第13-14页 |
·诱变和突变株的分离 | 第14页 |
·利用P_(petE)启动子研究基因的功能 | 第14-15页 |
3 原核生物中磷脂的合成 | 第15-20页 |
·磷脂的结构 | 第15-17页 |
·PlsB (GPAT,sn-甘油-3-磷酸脂酰转移酶) | 第17-18页 |
·磷脂合成起始的PlsX/Y途经 | 第18-20页 |
·PlsC (LPAAT,溶血磷脂酸脂酰转移酶) | 第20页 |
4 蓝藻的膜系统 | 第20-24页 |
·膜系统简介 | 第20-22页 |
·膜脂的组成 | 第22-23页 |
·脂酰基的特点 | 第23页 |
·膜脂的合成 | 第23-24页 |
5 本研究的目的和实验设计 | 第24-25页 |
第二章 材料与方法 | 第25-45页 |
1 实验材料 | 第25-26页 |
·菌株、藻株及其它 | 第25页 |
·实验试剂列表 | 第25-26页 |
·实验仪器列表 | 第26页 |
2 实验方法 | 第26-45页 |
·大肠杆菌突变株中plsB、plsX、plsC基因的克隆及测序 | 第26-27页 |
·集胞藻6803基因组文库互补E. coli 8813和 E. coli SM2-1突变株.. | 第27-29页 |
·大肠杆菌感受态的制备 | 第27-28页 |
·转化 | 第28-29页 |
·集胞藻6803的培养和转化 | 第29页 |
·蓝藻基因组的提取 | 第29-30页 |
·PCR反应 | 第30页 |
·质粒构建 | 第30-39页 |
·表达质粒的构建 | 第31-34页 |
·用于启动子替换的质粒构建 | 第34-39页 |
·蛋白的原核表达及抗体制备 | 第39页 |
·膜的分离纯化 | 第39-42页 |
·总膜的制备 | 第39-40页 |
·类囊体膜的分离纯化 | 第40-41页 |
·质膜和外膜的分离纯化 | 第41-42页 |
·SDS-PAGE | 第42页 |
·Western blot | 第42-43页 |
·P_(petE)对目的基因的表达调控 | 第43-45页 |
·P_(petE)-slr1510突变株的构建 | 第43页 |
·P_(petE)-slr1510/PrbcL-slr1511双突变株的构建 | 第43页 |
·突变株的缺铜培养 | 第43-44页 |
·光合放氧和呼吸耗氧能力测定 | 第44页 |
·电子显微镜观察 | 第44页 |
·全细胞光谱扫描 | 第44-45页 |
第三章 实验结果 | 第45-64页 |
1 大肠杆菌plsB、plsX、plsC突变的确认 | 第45页 |
2 集胞藻6803中plsX和plsC的鉴定 | 第45-49页 |
·plsX的鉴定 | 第46-47页 |
·plsC的鉴定 | 第47-49页 |
3 集胞藻6803中PlsX和PlsC的亚细胞定位 | 第49-55页 |
·蛋白表达、纯化及抗体制备 | 第49-52页 |
·类囊体膜、质膜、外膜的分离纯化 | 第52-54页 |
·类囊体膜的分离纯化 | 第53页 |
·质膜与外膜的分离纯化 | 第53-54页 |
·PlsX和PlsC的亚细胞定位 | 第54-55页 |
4 P_(petE)对slr1510的表达调控 | 第55-64页 |
·P_(petE)-slr1510突变株的构建 | 第56页 |
·突变株的PCR检测 | 第56-57页 |
·缺铜培养条件下突变株的表型 | 第57-61页 |
·缺铜培养条件下slr1510的表达被关闭 | 第57页 |
·生长曲线 | 第57-58页 |
·显微镜观察及光谱扫描分析 | 第58-59页 |
·光合放氧和呼吸耗氧能力 | 第59-61页 |
·NrtA、CP47 和Vipp1的Western blot分析 | 第61页 |
·P_(petE)-slr1510/PrbcL-slr1511双突变株 | 第61-64页 |
第四章 讨论 | 第64-67页 |
1 集胞藻6803中膜脂合成起始 | 第64-65页 |
2 集胞藻6803中的PlsC | 第65-67页 |
参考文献 | 第67-74页 |
致谢 | 第74页 |