| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-8页 |
| 1 引言 | 第8-17页 |
| ·抗旱、耐盐碱基因研究进展 | 第8-13页 |
| ·抗氧化酶基因 | 第8页 |
| ·水分胁迫蛋白基因 | 第8-9页 |
| ·转录因子基因 | 第9页 |
| ·渗透调节保护基因 | 第9-12页 |
| ·多元醇类合成相关基因 | 第10页 |
| ·糖类合成相关基因 | 第10-11页 |
| ·氨基酸及其衍生物合成相关基因 | 第11-12页 |
| ·脯氨酸及其合成的关键酶基因P5CS | 第12-13页 |
| ·向日葵遗传转化研究进展 | 第13-16页 |
| ·农杆菌介导的向日葵遗传转化法 | 第13-15页 |
| ·PEG介导的转化方法 | 第15页 |
| ·基因枪遗传转化法 | 第15-16页 |
| ·显微注射和花粉管通道法 | 第16页 |
| ·课题研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 P5CS基因的克隆与植物表达载体的构建 | 第17-27页 |
| ·材料 | 第17-18页 |
| ·质粒与菌株 | 第17页 |
| ·酶及主要试剂 | 第17-18页 |
| ·引物 | 第18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·方法 | 第18-22页 |
| ·目的基因的克隆 | 第18-21页 |
| ·碱裂解法小量提取pBIP5CS-F129A质粒 | 第18-19页 |
| ·P5CS基因片段的扩增 | 第19-20页 |
| ·目的片段与克隆载体的连接 | 第20页 |
| ·E.coli Top10感受态细胞的转化 | 第20页 |
| ·重组质粒阳性克隆的检测 | 第20页 |
| ·目的基因片段插入方向的鉴定 | 第20-21页 |
| ·P5CS基因植物表达载体的构建 | 第21-22页 |
| ·农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·目的片段的回收 | 第21页 |
| ·LBA4404感受态细胞的转化 | 第21页 |
| ·重组质粒检测 | 第21-22页 |
| ·结果与分析 | 第22-26页 |
| ·P5CS基因全长片段的扩增 | 第22页 |
| ·P5CS基因的克隆及其检测 | 第22-25页 |
| ·P5CS基因克隆 | 第22页 |
| ·目的基因序列测定 | 第22-24页 |
| ·P5CS基因插入方向的鉴定 | 第24-25页 |
| ·P5CS基因植物表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·表达载体的选择 | 第25页 |
| ·植物表达载体的构建及其检测 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 3 农杆菌介导法转化向日葵 | 第27-35页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·植物材料 | 第27页 |
| ·载体与菌株 | 第27页 |
| ·主要生化试剂 | 第27页 |
| ·培养基及其配方 | 第27-28页 |
| ·方法 | 第28-31页 |
| ·向日葵转化试验 | 第28页 |
| ·受体材料的准备 | 第28页 |
| ·侵染菌液的制备 | 第28页 |
| ·叶盘的转化 | 第28页 |
| ·转化体筛选和植株再生 | 第28页 |
| ·转化体鉴定 | 第28-31页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·PCR-Southern杂交检测 | 第30页 |
| ·探针制备 | 第30页 |
| ·凝胶转膜 | 第30-31页 |
| ·杂交 | 第31页 |
| ·洗膜 | 第31页 |
| ·免疫检测 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-34页 |
| ·向日葵叶盘的转化及抗性植株的再生 | 第31-32页 |
| ·受体基因型和侵染时间对叶盘芽分化的影响 | 第32-33页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第33页 |
| ·PCR-Southern杂交检测 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·抗生素浓度和农杆菌侵染外植体时间对转化效率的影响 | 第34-35页 |
| ·试管内开花问题 | 第35页 |
| 4 结论 | 第35-36页 |
| 致谢 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-42页 |
| 作者简介 | 第42页 |