| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-27页 |
| ·维生素C 发酵的研究现状 | 第16-18页 |
| ·维生素C 前体2-KGA 生物合成研究进展 | 第18-23页 |
| ·从葡萄糖一步发酵生产维生素 C 的前体2-酮基-L-古龙酸（2-KGA） | 第18-20页 |
| ·由山梨醇二步发酵转化2-KGA | 第20-21页 |
| ·由山梨醇直接转化2-KGA | 第21-23页 |
| ·基因组分析与基因克隆技术和代谢工程技术在VC 研究中的应用进展 | 第23-25页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌基因组结构 | 第23页 |
| ·氧化葡萄糖酸杆菌代谢途径中关键酶基因的克隆 | 第23-25页 |
| ·基因和代谢工程技术的应用 | 第25页 |
| ·展望 | 第25-26页 |
| ·选题依据与研究技术 | 第26-27页 |
| 第二章 快生小菌特性及与其它菌的亲缘关系研究 | 第27-35页 |
| ·材料与方法 | 第27-28页 |
| ·菌株、质粒和培养条件 | 第27页 |
| ·抗生素敏感性鉴定 | 第27页 |
| ·薄层层析(TLC)分析小菌、快生菌和醋酸菌的糖酸 | 第27页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳活性染色检测山梨糖脱氢酶 | 第27-28页 |
| ·PCR 扩增鉴定 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-33页 |
| ·快生小菌生长的形态与生长培养基 | 第28页 |
| ·快生小菌与Y25, H24 的抗生素敏感性比较 | 第28页 |
| ·薄层层析分析各快生菌株的产古龙酸（2KGA）和 L-山梨糖的能力 | 第28-30页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳活性染色分析 | 第30页 |
| ·L-山梨糖/L-山梨酮脱氢酶片段的 PCR 扩增分析 | 第30-31页 |
| ·小菌的16S rDNA 的 PCR 扩增分析 | 第31-33页 |
| ·结论与讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 小菌质粒研究及复制子合成 | 第35-44页 |
| ·材料与方法 | 第35-41页 |
| ·菌株，质粒与生长条件 | 第35页 |
| ·小菌质粒的检测和提取 | 第35页 |
| ·质粒的脉冲场凝胶电泳 | 第35-36页 |
| ·小菌的电转感受态的制备 | 第36页 |
| ·小菌质粒的回收、建库和转化 | 第36-37页 |
| ·小菌同源复制子的化学合成与拼接 | 第37-39页 |
| ·复制子突变为点的矫正 | 第39页 |
| ·电转化小菌 | 第39-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-43页 |
| ·小菌质粒的发现 | 第41页 |
| ·小菌质粒大小的确定、回收与纯化 | 第41页 |
| ·小菌质粒建库和小菌的电转 | 第41-42页 |
| ·小菌同源复制子序列的获得以及电转化小菌 | 第42-43页 |
| ·结论与讨论 | 第43-44页 |
| 第四章 L-山梨酮脱氢酶的特性分析 | 第44-55页 |
| ·材料与方法 | 第44-46页 |
| ·菌株、质粒与生长条件 | 第44页 |
| ·表达载体pET22b-SNDH 的构建 | 第44页 |
| ·细菌粗提液的制备 | 第44页 |
| ·SNDH 活性染色 | 第44页 |
| ·L-山梨酮脱氢酶的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·SNDH 的纯化 | 第45页 |
| ·利用网上软件进行 SNDH 二级结构和三级结构的预测 | 第45页 |
| ·SNDH 蛋白浓度的测定 | 第45页 |
| ·SNDH 的酶活测定和分析 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-54页 |
| ·pET22b-SNDH 载体的成功构建 | 第46-47页 |
| ·诱导温度和时间对 SNDH 表达量和可溶性的影响 | 第47-48页 |
| ·SNDH 蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| ·高级结构的预测 | 第49-51页 |
| ·纯化后的 SNDH 浓度测定 | 第51-52页 |
| ·不同底物时的SNDH 相对酶活 | 第52页 |
| ·金属离子对 SNDH 酶活的影响 | 第52-53页 |
| ·温度对 SNDH 酶活的影响 | 第53页 |
| ·pH 对SNDH 酶活的影响 | 第53页 |
| ·在底物是 D-木糖和L-阿拉伯糖时 SNDH 的 K_m值 | 第53-54页 |
| ·结论与讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 小菌中两个脱氢酶基因启动子的鉴定和它们在小菌和大肠杆菌活性的比较 | 第55-64页 |
| ·材料与方法 | 第55-58页 |
| ·菌株、质粒和生长条件 | 第55-56页 |
| ·5′-RACE 分析 | 第56页 |
| ·细菌粗提液的制备 | 第56页 |
| ·SDH 和SNDH 活性染色 | 第56页 |
| ·小菌突变体 DSM 4025 N1 的筛选 | 第56-57页 |
| ·薄层层析定性分析培养基中古龙酸的含量 | 第57页 |
| ·载体pSLDS，pSLDS-Psdh 和pSLDS-Psndh 的构建 | 第57页 |
| ·双亲接合转移 | 第57页 |
| ·半定量反转录 PCR | 第57-58页 |
| ·报告质粒的构建 | 第58页 |
| ·大肠杆菌中 SDH 和 SNDH 的酶活分析 | 第58页 |
| ·基因的accession numbers | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-62页 |
| ·启动子 Psdh 和 Psndh 的鉴定 | 第58-59页 |
| ·小菌中的 SDH 和 SNDH 的表达特性 | 第59-60页 |
| ·小菌突变菌株的获得 | 第60-61页 |
| ·启动子 Psdh 和 Psndh 的验证和它们在小菌中的活性比较 | 第61页 |
| ·启动子 Psdh 和 Psndh 在大肠杆菌中的活性比较 | 第61-62页 |
| ·结论与讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 产酸相关基因在普通酮古龙酸菌中表达研究 | 第64-73页 |
| ·材料与方法 | 第64-66页 |
| ·菌株，质粒与培养条件 | 第64页 |
| ·载体pBBR1-SDH 和pBBR1-SNDH 的构建 | 第64页 |
| ·细菌粗提液的制备 | 第64-65页 |
| ·SDH 和 SNDH 活性染色 | 第65页 |
| ·接合转移 | 第65页 |
| ·L-山梨糖脱氢酶和 L-山梨酮脱氢酶的相对定量 | 第65页 |
| ·定性分析培养基中 L-山梨糖和古龙酸的含量 | 第65页 |
| ·定量分析L-山梨糖和古龙酸的含量及古龙酸的转化率 | 第65-66页 |
| ·质粒稳定性的考察 | 第66页 |
| ·结果与分析 | 第66-71页 |
| ·载体pBBR1-SDH 和pBBR1-SNDH 的成功构建 | 第66-67页 |
| ·小菌接合转移子的获得 | 第67-68页 |
| ·小菌接合转移子中质粒稳定性的考察 | 第68-69页 |
| ·增加sdh 和sndh 的拷贝数对小菌代谢的影响 | 第69-71页 |
| ·结论与讨论 | 第71-73页 |
| 第七章 葡萄糖杆菌山梨醇脱氢酶基因分离分析 | 第73-84页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·菌株，质粒与生长条件 | 第73页 |
| ·细菌粗提液的制备 | 第73-74页 |
| ·SLDH 活性染色 | 第74页 |
| ·从氧化葡萄糖杆菌扩增sldh 基因 | 第74页 |
| ·SLDH 的体外反应产物分析 | 第74页 |
| ·载体pBBR1-SLDH 和pBBR1-Psdh-SLDH 的构建 | 第74页 |
| ·接合转移 | 第74-75页 |
| ·培养基中L-山梨糖和古龙酸的含量及它们的转化率分析 | 第75页 |
| ·质粒稳定性的考察 | 第75页 |
| ·结果与分析 | 第75-82页 |
| ·氧化葡萄糖杆菌 SLDH 的鉴定 | 第75-76页 |
| ·基因的获得和 SLDH 催化 D-山梨醇的产物分析 | 第76-79页 |
| ·SLDH 在小菌不同接合转移子中的表达 | 第79页 |
| ·SLDH 对小菌代谢的影响 | 第79-81页 |
| ·小菌接合转移子中质粒稳定性的考察 | 第81-82页 |
| ·结论与讨论 | 第82-84页 |
| 第八章 L-山梨糖脱氢酶和L-山梨酮脱氢酶对大肠杆菌代谢的影响 | 第84-89页 |
| ·材料与方法 | 第84-85页 |
| ·菌株，质粒与生长条件 | 第84页 |
| ·L-山梨糖脱氢酶和 L-山梨酮脱氢酶基因串联表达载体的构建 | 第84页 |
| ·SDH 和SNDH 在大肠杆菌游离活性的检测 | 第84-85页 |
| ·不同单糖对携带sdh 和sndh 基因的大肠杆菌代谢的影响 | 第85页 |
| ·不同添加物质对携带sdh 基因大肠杆菌代谢的影响 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-88页 |
| ·pBBR1MCS2-SDH-SNDH 载体的成功构建 | 第85-86页 |
| ·SDH 和SNDH 在大肠杆菌的功能活性检测 | 第86页 |
| ·不同的单糖对携带sdh 或sndh 的大肠杆菌代谢的影响 | 第86-88页 |
| ·葡萄糖对携带sdh 的大肠杆菌毒害机理的初步探讨 | 第88页 |
| ·结论与讨论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
